人LIGHT胞外段基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 |
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引用本文: | 郝文丽,江文正,闻洁君,樊燕,钱旻.人LIGHT胞外段基因的克隆及在大肠杆菌中的表达[J].细胞与分子免疫学杂志,2009,25(12). |
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作者姓名: | 郝文丽 江文正 闻洁君 樊燕 钱旻 |
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作者单位: | 华东师范大学生命科学学院,上海,200062 |
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基金项目: | 上海市青年科技启明星计划资助项目 |
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摘 要: | 目的:构建人LIGHT胞外段基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达.方法:从人外周血单核细胞来源的未成熟树突状细胞中提取总RNA,通过RT-PCR得到LIGHT胞外段基因,并将其克隆至pET32a(+)原核表达载体中,经双酶切鉴定及序列测定后的重组质粒转化入E.coli BL21,IPTG诱导表达目的蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot进行检测.结果:RT-PCR扩增出了大小为543 bp 的LIGHT胞外段基因,经测序证明序列正确.SDS-PAGE和Western blot分析证实重组质粒可表达出Mr约为41 000的蛋白.结论:成功地克隆了人LIGHT胞外段基因并在大肠杆菌中进行了表达为进一步研究LIGHT的功能打下了基础.
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关 键 词: | 基因克隆 原核表达 大肠杆菌 |
Cloning and expression of the extracellular region of human LIGHT gene in E.coli |
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Abstract: | |
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Keywords: | LIGHT |
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