| 人去唾液酸糖蛋白受体单克隆抗体制备及其初步应用 |
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| 引用本文： | 李军,陈磊,孙斌,张妤,钱海华,殷正丰. 人去唾液酸糖蛋白受体单克隆抗体制备及其初步应用[J]. 第二军医大学学报, 2013, 34(10): 1055-1060 |
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| 作者姓名： | 李军 陈磊 孙斌 张妤 钱海华 殷正丰 |
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| 作者单位： | 1.苏州大学医学部临床医学院,苏州 2150062.第二军医大学东方肝胆外科医院分子肿瘤研究室,上海 200438*通信作者 |
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| 基金项目： | 国家传染病重大专项课题(2012ZX10002012-010),国家高技术研究发展计划(“863”计划,2007AA02Z461),国家自然科学基金(81172207, 81272669). |
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| 摘 要： | 目的 制备人去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)的小鼠单克隆抗体,并应用该抗体检测ASGPR在细胞系和组织中的表达。方法 对ASGPR H1大亚基进行序列分析,选取ASGPR1全长序列制备免疫原。通过RT-PCR合成ASGPR1 cDNA,构建ASGPR1表达重组载体,在E. coli BL21中表达后纯化,获得目的抗原。应用传统融合杂交瘤技术制备小鼠单克隆抗体,常规检测单抗亚类和效价,竞争抑制实验鉴定单抗特异性。用流式细胞术和免疫组织化学法分别检测ASGPR在多种肝源性与非肝源性细胞系以及多种肝组织中的表达。结果 制备的单克隆抗体亚型为IgG1,效价达112 800。竞争抑制实验结果显示该单抗具有很好的ASGPR结合特异性,而且识别的肽段位于ASGPR胞外段。流式细胞术检测结果显示,ASGPR不同程度地表达于肝源性细胞系,但不表达于非肝源性细胞系。免疫组织化学检测结果显示,ASGPR专一性表达于正常肝组织和肝癌组织,在肝癌组织的表达与分化程度有关,高分化肝癌中的阳性率高于低分化肝癌(75.0% vs 28.6%,P<0.05)。结论 成功制备高特异性人ASGPR小鼠单克隆抗体,适用于用流式细胞术和免疫组织化学法检测ASGPR表达,可用于临床病理鉴定原发性肝癌与转移性肝癌。
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| 关 键 词： | 去唾液酸糖蛋白受体；单克隆抗体；肝肿瘤；流式细胞术；免疫组织化学 |
| 收稿时间： | 2013-04-19 |
| 修稿时间： | 2013-06-28 |
Preparation of mouse anti-human asialoglycoprotein receptor monoclonal antibody and its preliminary application |
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| LI Jun,CHEN Lei,SUN Bin,ZHANG Yu,QIAN Hai-hua and YIN Zheng-feng. Preparation of mouse anti-human asialoglycoprotein receptor monoclonal antibody and its preliminary application[J]. Former Academic Journal of Second Military Medical University, 2013, 34(10): 1055-1060 |
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| Authors: | LI Jun CHEN Lei SUN Bin ZHANG Yu QIAN Hai-hua YIN Zheng-feng |
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| Affiliation: | 1. School of Clinical Medicine, Medical College of Soochow University, Suzhou 215006, Jiangsu, China2. Molecular Oncology Laboratory, Eastern Hepatobiliary Surgery Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200438, China*Corresponding author. |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | asialoglycoprotein receptor monoclonal antibodies liver neoplasms flow cytometry immunohistochemistry |
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