RNA恒温扩增联合熔解曲线分析鉴定胞内分枝杆菌的应用研究

目的建立RNA恒温扩增联合熔解曲线分析技术（RIARD-MCA）鉴定胞内分枝杆菌的方法，评估其应用效果。方法以胞内分枝杆菌的16S rRNA的特异序列为检测靶标设计RNA探针和带有T7启动子的逆转录扩增引物，42℃恒温扩增实时检测后进行熔解曲线分析，对21种分枝杆菌标准株、5种非分枝杆菌和229株分枝杆菌临床分离株进行鉴别检测；同时以16S rRNA及hsp65基因PCR测序结果为金标准对照。结果RIARD-MCA在21种分枝杆菌标准株及5种非分枝杆菌检测中只有胞内分枝杆菌阳性，其他阴性，与测序结果一致；在分枝杆菌临床分离株检测中，鉴定胞内分枝杆菌63株，其余为非胞内分枝杆菌，PCR测序为胞内分枝杆菌63株，其余166株为非胞内分枝杆菌，其灵敏度为100%（63／63），特异度为100％（166／166）。结论RIARD-MCA鉴定胞内分枝杆菌具有较高的灵敏度、特异度和准确性，且检测快速，有望作为一种新的胞内分枝杆菌临床分离株鉴定方法。