RNA恒温扩增联合熔解曲线分析鉴定胞内分枝杆菌的应用研究 |
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引用本文: | 李园园,程 松,陆俊梅,等.RNA恒温扩增联合熔解曲线分析鉴定胞内分枝杆菌的应用研究[J].中国人兽共患病杂志,2014(1):58-62. |
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作者姓名: | 李园园 程 松 陆俊梅 等 |
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作者单位: | [1]苏州大学医学部基础医学与生物科学学院硕士研究生,苏州215123 [2]同济大学附属上海市肺科医院/上海市结核病肺重点实验室,上海200433 |
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基金项目: | 国家十二五传染病重大专项课题(No.2013ZX10003001-003) |
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摘 要: | 目的建立RNA恒温扩增联合熔解曲线分析技术(RIARD-MCA)鉴定胞内分枝杆菌的方法,评估其应用效果。方法以胞内分枝杆菌的16S rRNA的特异序列为检测靶标设计RNA探针和带有T7启动子的逆转录扩增引物,42℃恒温扩增实时检测后进行熔解曲线分析,对21种分枝杆菌标准株、5种非分枝杆菌和229株分枝杆菌临床分离株进行鉴别检测;同时以16S rRNA及hsp65基因PCR测序结果为金标准对照。结果RIARD-MCA在21种分枝杆菌标准株及5种非分枝杆菌检测中只有胞内分枝杆菌阳性,其他阴性,与测序结果一致;在分枝杆菌临床分离株检测中,鉴定胞内分枝杆菌63株,其余为非胞内分枝杆菌,PCR测序为胞内分枝杆菌63株,其余166株为非胞内分枝杆菌,其灵敏度为100%(63/63),特异度为100%(166/166)。结论RIARD-MCA鉴定胞内分枝杆菌具有较高的灵敏度、特异度和准确性,且检测快速,有望作为一种新的胞内分枝杆菌临床分离株鉴定方法。
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关 键 词: | RNA恒温扩增 熔解曲线 胞内分枝杆菌 |
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