JNK介导的Bcl⁃2磷酸化调控神经细胞缺氧缺糖再复氧复糖所致的自噬性细胞死亡

目的：探讨自噬在神经细胞缺氧缺糖再复氧复糖损伤过程中的机制。方法：通过改良Takei和Endo的方法分离培养Sprague?Dawley大鼠皮层神经细胞并鉴定。培养至7 d后，将细胞随机分为4组，均培养细胞至0.5、2.0、6.0及12.0 h：①空白对照组；②实验组：即缺氧缺糖再复氧复糖组；③JNK抑制剂处理对照组：JNK特异性抑制剂SP600125处理神经细胞0.5 h；④JNK抑制剂预处理预处理+实验组：应用JNK特异性抑制剂SP600125预处理0.5 h后进行缺氧缺糖再复氧复糖。结果：噻唑蓝（MTT）结果示神经细胞的活性在实验组中随复氧复糖时间的延长而逐渐下降；JNK抑制剂预处理+实验组在12 h才出现明显降低（P < 0.05）。电镜结果表明：实验组在0.5 h及2.0 h时，神经细胞内可见大量自噬泡及自噬溶酶体形成，6 h时自噬泡数量短暂降低后，在12 h又可见新“自噬潮”和大量已排空的自噬泡；JNK抑制剂预处理+实验组中，自噬泡在0.5 h和2.0 h时大量形成，随后随着复氧复糖时间的延长而逐渐减少。实验组和JNK抑制剂预处理+实验组，LC3Ⅱ蛋白表达在6 h前无差异，均表现为先增高再降低；而实验组LC3Ⅱ蛋白表达量在12 h却再次增加，JNK抑制剂预处理+实验组则持续降低。实验组JNK、Bcl?2的磷酸化水平及Beclin?1的蛋白表达量均随着复氧复糖时间的延长而逐渐增加；而在JNK抑制剂预处理+实验组，仅在12 h时才增加（P < 0.05）。同时，Bcl?2/Beclin?1复合物在实验组呈逐渐分离的趋势，JNK抑制剂则明显抑制了这种分离。结论：JNK/ Bcl?2/ Beclin?1信号的调节可能是缺氧缺糖后复氧复糖诱导神经细胞自噬性细胞死亡的机制之一。