人血小板膜糖蛋白GPIbα（H1-V289）的原核表达及其生物活性研究

目的获得重组的血小板膜糖蛋白GPIbα的N端片段（1-289氨基酸）,进一步研究其在血栓与止血过程中的生物功能。方法利用质粒pCMV3（编码GPIbαH1-V289）设计引物,构建pQE30-GPIbα（H1-V289）表达载体,转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达蛋白。用Ni-NTA琼脂糖层析柱不同pH值梯度淋洗法纯化蛋白,SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化产品纯度和免疫学活性,并观察重组蛋白对瑞斯托霉素和ADP诱导血小板聚集的影响。结果成功获得纯度较高的重组GPIbα（H1-V289）蛋白,浓度为0.6 mg/ml。Western blot检测结果显示,抗GPIbα单抗SZ2能在34 kd区域显示条带。而且纯品能有效抑制瑞斯托霉素诱导的血小板聚集,对ADP诱导的反应无抑制作用。结论重组蛋白具有较好的免疫原性和生物活性,并可以大量获得,为开发抗血栓药物奠定了基础。