| 抗内毒素噬菌体抗体库的构建及筛选 |
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| 引用本文： | 陈鸣,陆建华,府伟灵,俞丽丽,张雪,张波. 抗内毒素噬菌体抗体库的构建及筛选[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志, 2001, 8(2): 138-141 |
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| 作者姓名： | 陈鸣 陆建华 府伟灵 俞丽丽 张雪 张波 |
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| 作者单位： | 1. 第三军医大学西南医院检验科,
2. 重庆市大坪医院妇产科 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（39570042） |
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| 摘 要： | 目的构建一个鼠源性的抗内毒素单链噬菌体抗体库，从中筛选出对内毒素具有较高亲和力的单链抗体。方法从小鼠脾细胞中提取总RNA，通过RT-PCR技术扩增出小鼠抗体重链、轻链可变区基因（VH，VL），用Linker将VH，VL交联形成单链抗体可变区片段（ScFv）。经NotⅠ，SfiⅠ双酶切后与经同样双酶切的pCANTAB5E载体相连，转化入大肠杆菌TG1以构建鼠抗内毒素单链噬菌体抗体库。在援救噬菌体抗体库后，用内毒素淘筛特异性的ScFv，富集的噬菌体阳性克隆重新感染TG1。在96孔板分别援救单个含特异性ScFv的TG1菌落，最后随机挑选出190个菌落经ELISA检测抗内毒素ScFv。结果小鼠血清中抗内毒素的效价为1∶12800。提取的总RNA浓度为12.3813μg/ml，纯度较好。扩增出的VH长约340bp，VL约320bp，ScFv约800bp。转化入TG1后有约1.9×107个菌落。淘筛一轮过后即有3×104阳性菌落长出，190个菌落经ELISA检测有2个阳性克隆。结论成功地构建了一个库容量为1.9×107的鼠抗内毒素单链噬菌体抗体库，并从中筛选出了2株抗内毒素ScFv。
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| 关 键 词： | 噬菌体抗体库 内毒素 单链抗体 |
| 文章编号： | 1007-385X（2001）02-0138-04 |
| 收稿时间： | 2001-02-05 |
| 修稿时间： | 2001-02-05 |
Construction and Preliminary Screening of Anti Endotoxin Phage Antibody |
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| CHEN Ming,LU Jian hu,FU Wei ling,YU Li li,ZHANG Xue and ZHANG Bo. Construction and Preliminary Screening of Anti Endotoxin Phage Antibody[J]. Chinses Journal of Cancer Biotherapy, 2001, 8(2): 138-141 |
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| Authors: | CHEN Ming LU Jian hu FU Wei ling YU Li li ZHANG Xue ZHANG Bo |
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| Affiliation: | Laboratory Diagnostic Department, South Western Hospital, the Third Military Medical University, Chongqing 400038, China;Laboratory Diagnostic Department, South Western Hospital, the Third Military Medical University, Chongqing 400038, China;Laboratory Diagnostic Department, South Western Hospital, the Third Military Medical University, Chongqing 400038, China;Laboratory Diagnostic Department, South Western Hospital, the Third Military Medical University, Chongqing 400038, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | phage antibody library endotoxin |
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