| 应用荧光探针H2DCF-DA检测光照致细胞内活性氧产生的初步研究 |
| |
| 引用本文： | 李晓松,刘凡光,顾瑛,王雷,戴维德,丁新民,曾晶.应用荧光探针H2DCF-DA检测光照致细胞内活性氧产生的初步研究[J].中国激光医学杂志,2004,13(2):69-74. |
| |
| 作者姓名： | 李晓松 刘凡光 顾瑛 王雷 戴维德 丁新民 曾晶 |
| |
| 作者单位： | 1. 解放军总医院激光医学科,北京市,100853
2. 北京理工大学光电工程系 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(60078021) |
| |
| 摘 要： | 目的应用荧光显微镜及新型荧光探针H2DCF-DA检测在光源照射过程中人脐静脉血管内皮细胞(ECV304)内活性氧的产生情况。方法将ECV304细胞接种于35mm培养皿中,24h后加入H2DCF-DA,使其终浓度为10μmol/L,孵育30min。利用荧光显微镜的激发光源作为照射光源,在采集荧光图像的同时完成光源照射,光源输出波长范围为460～490nm,功率密度约为100mW/cm2。连续采集DCF的荧光图,观察细胞内DCF荧光的变化情况,采用计算机图像处理和分析技术,求得细胞内不同照射时间点DCF平均荧光强度,进而得到平均荧光强度-时间曲线。另外,使用线粒体特异标记探针MitoFluorRed589与H2DCF-DA共同孵育细胞,分别采集同一细胞的DCF的荧光图和MitoFluorRed589的荧光图,并利用像素-荧光强度分析方法来确定DCF荧光在细胞内的分布位置。结果在光源照射的开始阶段,ECV304细胞内的DCF荧光强度迅速增加,在第10s时便上升至第2s时的2.2倍,但是随着照射时间逐渐延长,荧光强度增幅逐渐变小,到第60s时上升至第2s时的4.7倍。观察时间进一步延长,DCF的荧光强度的变化似乎进入平台期,继而开始出现下降。考察DCF荧光在ECV304细胞内的分布位置主要通过比较细胞内不同区域的I1/I2值,通过图像分析与计算得到线粒体区、细胞核区以及细胞质非线粒体区内I1/I2值分
|
| 关 键 词： | 荧光探针 H2DCF-DA 检测 光照 活性氧 脐静脉 血管内皮细胞 |
| 文章编号： | 1003-9430(2004)02-0069-06 |
| 收稿时间： | 2003/8/15 |
| 修稿时间： | 2003年8月15日 |
Detection of ROS Induced by Light Irradiation in Endothelial Cell During Light Irradiation Applying H2DCF-DA:A Preliminary Study |
| |
| LI Xiao song,LIU Fan guang,GU Ying,WANG Lei,DAI Wei de,DING Xin min,ZENG Jing.Detection of ROS Induced by Light Irradiation in Endothelial Cell During Light Irradiation Applying H2DCF-DA:A Preliminary Study[J].Chinese Journal of Laser Medicine & Surgery,2004,13(2):69-74. |
| |
| Authors: | LI Xiao song LIU Fan guang GU Ying WANG Lei DAI Wei de DING Xin min ZENG Jing |
| |
| Institution: | LI Xiao song1,LIU Fan guang1*,GU Ying1,WANG Lei2,DAI Wei de1,DING Xin min1,ZENG Jing1 1 Department of Laser Medicine,Chinese PLA General Hospital,Beijing 100853,China 2 Department of Optical Engineering,Beijing Institute of Technology |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | H2DCF DA Low level laser therapy Reactive oxygen species Mitochondria Fluorescent microscope |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
