| 摘 要： | 目的非酒精性脂肪肝(NAFLD)是代谢综合征的肝表现,肝脂肪变、肝炎症及肝细胞气球样变是NAFLD的必要条件。在本研究中,我们旨在系统地研究传统中药津力达(JLD)颗粒能否抑制高脂饮食诱导的C57BL/6J小鼠肝细胞焦亡及游离脂肪酸诱导的非酒精性脂肪肝HepG2细胞模型焦亡,从而改善NAFLD。方法动物实验通过高脂饮食喂养C57BL/6J建立脂肪肝模型,按分组分别灌胃给与JLD颗粒或羟甲纤维素钠(CMC-Na)20周。生化分析方法检测小鼠血清内甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)、低密度脂蛋白(LDL-C)和游离脂肪酸(NEFA)含量。HE和油红染色检测肝细胞脂滴及炎细胞浸润,Western印迹法检测焦亡相关蛋白NLRP3,胱天蛋白酶1,P20和IL~(-1)β的表达,并通过实时PCR(q RT-PCR)检测胱天蛋白酶1,IL~(-1)8和Il-1β的基因表达水平。细胞实验使用HepG2细胞,给与或不给予JLD,然后暴露于游离脂肪酸(FFA)中共孵育18 h,MTS检测HepG2肝癌细胞生存活性,检测细胞各组甘油三酯(TG)和GOT含量,尼罗红染色观察HepG2细胞脂滴,Western印迹法技术检测细胞焦亡通路相关信号分子NLRP3,胱天蛋白酶1、IL~(-1)8和IL~(-1)β蛋白表达。结果动物实验结果显示,与正常组相比,模型组小鼠TG,GOT,GPT,LDL-C和NEFA含量明显增加(P<0.01);HE和油红染色显示脂滴增多;炎症小体NLRP3、焦亡通路依赖蛋白胱天蛋白酶1和p20蛋白表达水平升高(P<0.01);胱天蛋白酶1,IL~(-1)8和IL~(-1)β基因表达水平升高(P<0.05)。给予JLD后明显降低TG,LDL-C和NEFA的含量,减少细胞内的脂滴堆积,抑制焦亡通路蛋白和基因的表达(P<0.01)。细胞实验结果显示,与FFA组相比,JLD促进FFA损伤HepG2肝癌细胞18 h后细胞增殖,降低TG、GOT的含量(P<0.01),脂滴明显减少,下调焦亡蛋白NLRP3,胱天蛋白酶1,P20和IL~(-1)β的表达(P<0.01)。结论 JLD具有治疗NAFLD的作用。这种作用可能是通过抑制焦亡通路基因和蛋白的表达介导的,从而为JLD的临床应用治疗NAFLD提供了实验依据。
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