| 摘 要： | 目的中药质量控制一直是中药现代化的重点和难点,随着中药国际化的进程,FDA也明确提出植物药申报时需提供适于质量一致性评价的生物效价(Bioassay)方法。目前,国际上获批的生物效价方法以均是以计算待测物与标准物质(同质物质)的相对效价值表示,由于中药成分复杂,很难找到同质物质作为标准物质使用,因此目前尚未有复方中药开发相对生物效价方法的报道。本课题组尝试选择适当的中药有效成分为标准物质,以效应曲线的斜率比为计算方法,建立相对生物效价检测方法,拟用于活血化瘀类中药质量生物控制。方法依据美国FDA最新颁布的《Botanical Drug Development Guidance for Industry》中对植物药生物效价研究提出的要求,针对活血化瘀药物多数具有的抗血小板聚集的作用机制,建立家兔体外抗血小板聚集检测方法,参照USP39中对方法学开发及方法学验证的要点要求,选择纯度高、来源稳定且具有较好的抗血小板聚集活性的中药活性成分丹酚酸B作为标准物质建立相对效价测定方法,并且从线性与范围、重复性、精密度及准确度四个方面对方法进行系统考察。同时开展了第三方实验室的验证研究,对方法的可推广性进行了评估。结果以LOG(剂量)为X轴,抑制率为Y轴,绘制标准物质丹酚酸B量效曲线,显示其呈现较好的线性关系。(y=0.8262x+0.0189,R2=0.9901),重复性考察RSD=11.9%,日内精密度为10.53%,日间精密度为10.58%,准确度考察,检测丹酚酸B的相对效价值,结果显示6次测定的效价值为1.083±0.129,测定准确度为8.3%,方法满足美国药典USP39以及CFDA颁布的《生物制品质量控制分析方法验证技术一般原则》中对离体效价实验方法对精密度的要求,方法通过验证。将方法推广应用,委托第三方实验室采用该方法对同一检测样本进行检测,检测结果实验室间无统计学差异,提示该方法具有较好的实验室间重现性。两家机构结果均显示加速过期样品效价值较提取物效价值有明显降低(P<0.01),证明方法有较好的区分性。结论经方法优化及方法学验证,所建立的抗血小板聚集生物效价检测方法与活血化瘀作用机制相关,与标准物质丹酚酸B计算出的相对效价值具有较好的精密度、准确度和重现性,可作为生物检测方法,用于活血化瘀类中药的质量控制。
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