| 基于Oct4基因启动子活性的高通量药物筛选细胞模型的构建及应用 |
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| 引用本文： | 田银,李珊珊,魏明月,张欢,汤熙翔.基于Oct4基因启动子活性的高通量药物筛选细胞模型的构建及应用[J].中国海洋药物,2024,43(3):37-45. |
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| 作者姓名： | 田银 李珊珊 魏明月 张欢 汤熙翔 |
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| 作者单位： | 福州大学先进制造学院,自然资源部第三海洋研究所,自然资源部第三海洋研究所,自然资源部第三海洋研究所,福州大学先进制造学院 |
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| 基金项目： | 亚洲海洋合作基金(No.99950410)；福建省科技计划项目(No.2021N0028) |
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| 摘 要： | 目的 以人源Oct4基因启动子为靶点构建双荧光素酶报告基因载体，建立高通量药物筛选细胞模型，筛选能显著上调Oct4基因启动子活性的海洋来源微生物次级代谢产物； 方法 将人源Oct4基因启动子序列克隆至萤火虫荧光素酶报告基因载体pGL6-TA，构建重组质粒pGL6-TA-Oct4-luc并与内参质粒pRL-SV40-C瞬时共转染293T细胞，以OAC1作为激活剂，建立双荧光素酶报告基因筛选系统，通过检测相对荧光素酶表达水平的变化反映Oct4基因启动子活性，对309份海洋来源微生物发酵粗提物样品进行活性筛选；CCK-8法检测粗提物对间充质干细胞活力的影响； 结果 双酶切和基因测序法证实重组质粒构建正确；将质粒转染293T细胞后，与空载pGL6-TA相比较，重组质粒pGL6-TA-Oct4-luc具有显著启动子活性（P＜0.05）；与0 μmol／L相比较，粗提物Z-179-1处理细胞24 h后Oct4基因启动子活性明显升高（P＜0.05），作用浓度为10 μg/mL时效果最为显著；CCK-8法检测结果显示Z-179-1显著促进间充质干细胞的增殖，且呈剂量依赖性； 结论 成功建立了靶向人源Oct4基因启动子的药物高通量筛选细胞模型，并筛选出海洋来源微生物发酵粗提物Z-179-1能显著活化Oct4基因启动子，其活性成分值得开展进一步化学研究。
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| 关 键 词： | 干细胞 多能性 Oct4 海洋微生物 药物筛选模型 |
| 收稿时间： | 2022/10/28 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2023/5/4 0:00:00 |
Construction and application of high-throughput drug screening cell model based on Oct4 gene promoter activity |
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| TIANYIN,and.Construction and application of high-throughput drug screening cell model based on Oct4 gene promoter activity[J].Chinese Journal of Marine Drugs,2024,43(3):37-45. |
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| Authors: | TIANYIN and |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Stem cell Pluripotency Oct4 Marine microorganisms Drug screening modle |
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