| 胞嘧啶脱氨酶和血管内皮抑素基因慢病毒载体的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 陈蓉,滕皋军.胞嘧啶脱氨酶和血管内皮抑素基因慢病毒载体的构建与鉴定[J].中华生物医学工程杂志,2012,18(2). |
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| 作者姓名： | 陈蓉 滕皋军 |
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| 作者单位： | 东南大学附属中大医院放射科东南大学江苏省分子影像与功能影像重点实验室,南京,210009 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目 |
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| 摘 要： | 目的 构建携带胞嘧啶脱氨酶(CD)和血管内皮抑素(ES)基因的慢病毒载体.方法 根据GenBank提供大肠杆菌源CD和ES基因序列设计、合成2个基因并构建与荧光蛋白融合的真核表达载体pEGFP-CD和pDS-RED-ES.酶切和测序鉴定后,将载体瞬时转染HEK293细胞,运用实时PCR检测CD和KS基因表达情况.把载体中基因片段EGFP-CD和DS-RED-ES通过BP/LR重组分别构建慢病毒载体,并利用293FT细胞进行慢病毒的包装.将病毒原液浓缩,并测定病毒滴度.结果 酶切、测序及PCR鉴定证实构建出慢病毒载体pLenti6.3-CD-EGFP和pLenti6.3- ES- Monomer - DsRed.感染293FT细胞后荧光显微镜下观察到GFP和DsRed的表达.浓缩慢病毒滴度分别为2.2× 108 TU/ml和6.5×107 TU/ml.结论 成功构建了CD和ES基因慢病毒载体.
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| 关 键 词： | 胞嘧啶脱氨酶 血管内皮抑素 慢病毒 载体 聚合酶链反应 |
Construction and identification of lentiviral vectors with cytosine deaminase and endostatin |
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| CHEN Rong
,
TENG Gao-jun.Construction and identification of lentiviral vectors with cytosine deaminase and endostatin[J].Chinese Journal of Biomedical Engineering,2012,18(2). |
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| Authors: | CHEN Rong TENG Gao-jun |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cytosine deaminase Endostatin Lentiviral Vectors Polymerase chain reaction |
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