| 人乳头状瘤病毒86E7重组蛋白的高效表达、纯化和表征 |
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| 引用本文： | 刘淑清,孙明忠. 人乳头状瘤病毒86E7重组蛋白的高效表达、纯化和表征[J]. 大连医科大学学报, 2007, 29(6): 521-524 |
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| 作者姓名： | 刘淑清 孙明忠 |
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| 作者单位： | 大连医科大学,生物化学与分子生物学教研室,辽宁,大连,116044;大连医科大学,生物技术专业,辽宁,大连,116044 |
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| 基金项目： | 大连医科大学科研教学启动经费 |
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| 摘 要： | [目的]基因工程法构建谷胱甘肤S-转移酶(GST)-人乳头状瘤病毒(Human papillomavirus)HPV86 E7融合蛋白表达质粒,高效表达、纯化、鉴定蛋白质和分析蛋白质的存在形式.[方法]GST-HPV86 E7融合蛋白基因与pGEX-6P-1载体连接成重组表达质粒pGEX-6P-1-GST-HPV86 E7,重组质粒转入BL21大肠杆菌,经IPTG诱导表达融合蛋白GST-HPV86 E7,柱上切除GST标签,Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化蛋白,SDS-PAGE、MALDI-TOF和色谱质谱联用系统分别用于蛋白质纯度分析、分子量测定和蛋白鉴定;非变性电泳和分子筛排阻色谱用于蛋白质四级结构的分析.[结果]HPV86 E7大肠杆菌中正确表达,基质辅助激光解析飞行时间质谱测得的HPV86 E7精确分子量为(11319.76±5.66)Da.反相高压液相色谱-电喷雾串联质谱鉴定的匹配肽段有11个肽段,氨基酸的覆盖率为90%.非变性PAGE和凝胶过滤层析实验观察到了HPV86 E7的单聚体、二聚体及多聚体.[结论]重组质粒pGEX-6P-1-GST-HPV86 E7成功构建,诱导后高效表达GST-HPV86 E7融合蛋白,HPV86 E7得到纯化,质谱分析证实表达蛋白为86E7蛋白,以多聚体形式存在.
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| 关 键 词： | 人乳头状瘤病毒 E7蛋白 纯化 表征 结构 |
| 文章编号： | 1671-7295（2007）06-0521-04 |
| 收稿时间： | 2007-07-27 |
| 修稿时间： | 2007-10-04 |
Expression, purification and characterization of recombinant human papillomavirus 86 E7 |
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| LIU Shu-qing and SUN Ming-zhong. Expression, purification and characterization of recombinant human papillomavirus 86 E7[J]. Journal of Dalian Medical University, 2007, 29(6): 521-524 |
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| Authors: | LIU Shu-qing and SUN Ming-zhong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | human papillomavirus(HPV) E7 purification characterization structure |
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