无流体剪切力条件下ADAMTS13裂解内皮细胞上特大血管性血友病因子的研究

目的：研究血管性血友病因子裂解酶（ADAMTS13）在无流体剪切力下裂解内皮细胞上特大血管性血友病因子（ULVWF）的分子机制，为探明血栓性血小板减少性紫癜（TTP）和其他血栓性疾病的发病机理提供理论依据。方法：通过免疫荧光显微镜观察ADAMTS13在无流体剪切力下裂解内皮细胞表面上ULVWF的情况，采用ELISA测定不同条件下培养基中VWF抗原量的变化。ELISA和Western blot分别测定有无流体剪切力或凝血因子VIII(FVIII)条件培养基中的VWF和蛋白水解片段的数量。多聚体分析评估ADAMTS13裂解内皮细胞上ULVWF的情况。将组胺刺激的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）与ADAMTS13和各种N-和C-末端截断的突变体一起孵育，通过免疫荧光显微镜观察与细胞保持结合的ULVWF,ELISA测定内皮细胞释放出的ULVWF，确定降解内皮细胞上ULVWF所需的ADAMTS13结构域。结果：在无流体剪切力下，重组ADAMTS13和血浆ADAMTS13迅速降解了内皮细胞表面上新形成的ULVWF。ULVWF的蛋白水解过程依赖于培养时间、ADAMTS13浓度和剪切力。ADAMTS13...