骨髓巨噬细胞M1/M2亚群失衡对免疫介导的新型再生障碍性贫血模型小鼠发病的影响

目的探讨巨噬细胞对新型免疫介导的再生障碍性贫血（AA）模型小鼠发病的影响。方法以正常雌性B6D2F1（F1）小鼠作为空白对照（对照组，3只），应用双磷酸盐（Clodronate）脂质体尾静脉注射的方法去除小鼠的巨噬细胞（CLO组，4只），以PBS脂质体处理小鼠为阴性对照（PBS组，4只）。并在注射脂质体后以全身辐照（TBI）联合异基因淋巴细胞输注的方法制备F1 AA小鼠模型，分别记为CLO+AA组和PBS+AA组。骨髓活检病理学检查、外周血细胞计数观察各组小鼠AA的程度；流式细胞术检测小鼠骨髓CD4⁺/CD8⁺ T淋巴细胞亚群和巨噬细胞亚群；ELISA法检测各组小鼠外周血血浆中IFN-γ、TNF-α、G-CSF、GM-CSF、TPO、EPO的水平变化。结果与PBS+AA组相比，去除巨噬细胞的CLO+AA组小鼠骨髓脂肪化明显改善。PBS+AA组和CLO+AA组的HGB分别为（91.50±31.63）、（110.65±24.15）g/L，PLT分别为（90.85±121.90）×10⁶/L、（461.13±483.45）×10⁶/L，差异均有统计学意义（P值均<0.05）。PBS+AA组和CLO+AA组CD4⁺ T淋巴细胞占骨髓细胞的比例分别为（18.50±10.17）％、（7.58±8.00）％；CD8⁺ T淋巴细胞占骨髓细胞的比例分别为（36.23±6.40）％、（6.67±5.78）％。去除巨噬细胞后，CD4⁺和CD8⁺ T淋巴细胞比值均下降，但CD8⁺ T细胞减少程度更大，差异均有统计学意义（P值均<0.05）。和PBS+AA组相比，CLO+AA组小鼠的脾脏和骨髓巨噬细胞比例均明显减少，M1型巨噬细胞减少程度明显高于M2型，差异均有统计学意义（P值均<0.05）。PBS+AA组和CLO+AA组外周血中IFN-γ水平分别为（602.37±104.62）、（303.01±87.22）ng/L；TNF-α水平分别为（34.46±1.42）、（23.25±4.21）ng/L；GM-CSF水平分别为（9.32±2.00）、（64.85±12.25）ng/L；G-CSF水平分别为（5 891.78±2 632.39）、（17 784.16±488.36）ng/L；EPO水平分别为（9 667.31±4 501.95）、（2 078.02±897.56）ng/L；TPO的浓度分别为（6.36±2.09）、（11.67±2.86）ng/L，差异均有统计学意义（P值均<0.05）。结论该实验证实在新型F1 AA小鼠模型中巨噬细胞参与了AA的发病。提前去除巨噬细胞，F1 AA模型小鼠的血象和骨髓损伤程度得以改善。正负造血调控因子的改变和巨噬细胞M1/M2亚群失衡可能是造成AA微环境损伤、最终引起AA发病的重要机制。