| 蛋白激酶Nemo样激酶基因重组腺病毒载体的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | Cheng XW,Liang JB,Miao SY,Wang LF. 蛋白激酶Nemo样激酶基因重组腺病毒载体的构建与鉴定[J]. 中国医学科学院学报, 2011, 33(6): 632-637 |
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| 作者姓名： | Cheng XW Liang JB Miao SY Wang LF |
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| 作者单位： | 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室; |
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| 基金项目： | 国家重大研究计划项目(2011CB944302); 国家重点实验室专项基金(2060204); 北京协和医学院青年科研基金(2010004)~~ |
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| 摘 要： | 目的构建含有蛋白激酶Nemo样激酶(NLK)的重组腺病毒载体。方法采用RT-PCR方法在人胚肾细胞系HEK293T细胞中扩增NLK基因及其突变体K155M、T286V和C425Y,同时在目的基因的C端添加便于蛋白表达检测的FLAG tag,经与载体pAdTrack-CMV连接、转化、筛选、鉴定后,将Western blot检测表达正确的重组过渡质粒pAdTrack-CMV-NLK及其突变体再经酶切、电转入BJ5183感受态细胞(已包含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1)同源重组,并筛选、鉴定、扩增。通过PacI酶切后,以快速简便的乙醇沉淀法替代传统的酚-氯仿-异戊醇法回收酶切产物,用高效低毒高稳定性的FuGENE HD转染试剂替代传统的lipofectamin 2000转染低代数的HEK293A包装细胞,进行病毒包装。包装后的重组腺病毒感染结直肠癌细胞HCT116,Western blot检测以确认NLK及其突变体蛋白的表达。结果经PCR、测序及Western blot检测证实,成功构建了携带NLK基因及其突变体的腺病毒载体,PCR及限制性内切酶酶切鉴定重组过渡质粒pAdTrack-CMV-NLK及其突变体与腺...
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| 关 键 词： | 蛋白激酶Nemo样激酶 重组腺病毒载体 同源重组 |
Construction and identification of nemo-like kinase gene recombinant adenovirus vector |
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| Cheng Xiao-Wen,Liang Jun-Bo,Miao Shi-Ying,Wang Lin-Fang. Construction and identification of nemo-like kinase gene recombinant adenovirus vector[J]. Acta Academiae Medicinae Sinicae, 2011, 33(6): 632-637 |
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| Authors: | Cheng Xiao-Wen Liang Jun-Bo Miao Shi-Ying Wang Lin-Fang |
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| Affiliation: | CHENG Xiao-wen,LIANG Jun-bo,MIAO Shi-ying,WANG Lin-fang National Laboratory of Medical Molecular Biology,Institute of Basic Medical Sciences,CAMS and PUMC,Beijing 100005,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | nemo-like kinase adenovirus vector homogenous recombination |
| 本文献已被 CNKI PubMed 等数据库收录！ |
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