人IGF-Ⅱ RIA的建立及初步应用

目的:建立高特异性和高灵敏度的人胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)放射免疫分析方法,用于测定人血清以及培养液中IGF-Ⅱ水平。方法:用人工合成的IGF-Ⅱ多肽连接甲状腺球蛋白,多次免疫兔子获取高效价、高特异的人IGF-Ⅱ抗体。用氯氨T法制备125I标记的IGF-Ⅱ,经交联葡聚糖凝胶(Sephadex G-25)纯化。抗原抗体反应采用平衡一步法,4℃温浴24h后经PR试剂分离结合和游离的标记抗原。用该法测定正常献血员150例和肝癌患者180例,并比较了肝癌患者介入治疗前后IGF-Ⅱ水平的变化。结果:该法测定范围为(0.1～24.3)ng/ml,最低检出值<0.1ng/ml,批内和批间误差<6.3%和10.0%。正常献血员血清IGF-Ⅱ水平(1.266±0.298)ng/ml明显低于肝癌各组患者(P<0.05);肝癌患者进行介入治疗3d后IGF-Ⅱ水平(4.263±1.411)ng/ml明显低于治疗前(4.916±1.24)ng/ml(P<0.05);介入治疗后3d与治疗后1个月(4.796±1.647)ng/ml水平相比无明显差异。结论:该法稳定、简便、特异、灵敏,适于检出人血清中的IGF-Ⅱ水平。