| 细菌内同源重组高效制备人突变p27基因重组腺病毒 |
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| 引用本文： | 陈珺,徐少勇,邓长生,王家宁,黄永章.细菌内同源重组高效制备人突变p27基因重组腺病毒[J].第四军医大学学报,2004,25(5):406-409. |
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| 作者姓名： | 陈珺 徐少勇 邓长生 王家宁 黄永章 |
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| 作者单位： | 郧阳医学院附属人民医院消化内科,湖北,十堰,442000;武汉大学中南医院消化内科,湖北,武汉,430071;郧阳医学院附属人民医院消化内科,湖北,十堰,442000;武汉大学中南医院消化内科,湖北,武汉,430071 |
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| 摘 要： | 目的:利用细菌内同源重组法,构建含人突变p27(hp27mt)基因重组腺病毒. 方法:hp27mt自载体pORF9-hp27mt中切出,亚克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV中,形成转移质粒pShuttle-CMV-hp27mt;然后再用PmeI线性化的pShuttle-CMV-hp27mt转化含腺病毒骨架质粒pAdeasy-1的超感受态BJ5183,使其在细菌内发生同源重组. 重组质粒鉴定正确后经PacI酶切,转入Ad293细胞,包装成重组腺病毒Ad-hp27mt. 采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,用紫外分光光度计进行滴度测定. 结果:用含pShuttle-CMV-hp27mt转化含pAdeasy-1的超感受态BJ5183后,可获得约30%的阳性重组质粒. PCR检测表明重组腺病毒含有目的基因. 滴度为7.95×1015 pfu/L. 结论:用细菌内同源重组法可快速、高效制备均一的高滴度重组腺病毒. 为研究p27mt对消化道肿瘤的治疗奠定了基础.
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| 关 键 词： | 同源重组 细菌 重组腺病毒 p27mt基因 |
| 文章编号： | 1000-2790(2004)05-0406-04 |
| 修稿时间： | 2003年10月28 |
Efficient generation of human mutant p27 gene recombinant adenovirus by homologous recombination in bacteria |
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| CHEN Jun ,XU Shao Yong ,DENG Chang Sheng ,WANG Jia Ning ,HUANG Yong Zhang.Efficient generation of human mutant p27 gene recombinant adenovirus by homologous recombination in bacteria[J].Journal of the Fourth Military Medical University,2004,25(5):406-409. |
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| Authors: | CHEN Jun XU Shao Yong DENG Chang Sheng WANG Jia Ning HUANG Yong Zhang |
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| Institution: | CHEN Jun 1,2,XU Shao Yong 1,DENG Chang Sheng 2,WANG Jia Ning 1,HUANG Yong Zhang 1 1Department of Gastroenterology,Affiliated People's Hospital,Yunyang Medical College,Shiyan 442000,China,2Department of Gastroenterology,Zhongnan Hospital,Wuhan University,Wuhan 430071,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | homogenous recombination bacteria recombinant adenovious p27mt gene |
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