靶向转化生长因子β1的siRNA真核表达载体的构建及鉴定 |
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作者姓名: | 付荣泉 盛吉芳 丁继光 吴金国 洪亮 孙庆丰 方辉 |
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作者单位: | 温州医学院附属第三医院感染科,浙江,瑞安,325200;浙江大学医学院附属第一医院感染科,浙江,杭州,310003 |
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基金项目: | 浙江省自然科学基金计划项目 |
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摘 要: | [目的]构建靶向转化生长因子β1(TGFβ1)小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体.[方法]设计二个siRNA作用靶点,体外合成的相应双链DNA被插入pSilencer-2.1质粒中,对该重组表达载体进行酶切鉴定及DNA测序.采用脂质体转入HSC-T6细胞中,利用RT-PCR法和western-blot分别检测TGFβ1 mRNA和蛋白的表达.[结果]靶向TGFβ1 的siRNA-a和siRNA-b二个表达质粒是成功构建; 与无关对照组相比,siRNA-b组对TGFβ1mRNA和蛋白表达均明显下调( P 〈0.01),siRNA-a组无明显下调( P 〉0.05).[结论]成功构建了靶向TGFβ1 基因的siRNA表达质粒,为进一步研究其阻断肝纤维化打下基础.
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关 键 词: | RNA 遗传载体 转化生长因子β |
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