| 摘 要： | 目的探讨丝裂原活化蛋白激酶p38抑制剂对蛛网膜下腔出血(SAH)后神经功能的保护作用及其机制。方法取SPF级成年雄性SD大鼠27只,选用视交叉前池注血法制作SAH模型,剔除3只死亡大鼠,采用随机数字表法将24只大鼠分为假手术组、SAH组、二甲基亚砜(DMSO)组、DMSO+p38抑制剂组,每组6只。采用Western blot分别检测p38、磷酸化p38、帕金森病蛋白7(DJ-1)、自噬相关基因5(Atg5)、自噬接头蛋白p62、微管相关蛋白Ⅰ轻链3(LC3)-Ⅰ和LC3-Ⅱ蛋白表达,并用Garcia神经功能评分标准判断神经损伤。PC12细胞加氧合血红蛋白建立体外SAH模型,完全随机分为假手术组、SAH组、DMSO组及DMSO+p38抑制剂组,利用荧光探针JC-1观察线粒体膜电位的变化。结果 (1)4组大鼠p38、磷酸化p38和DJ-1蛋白表达的差异均有统计学意义(F值分别为94.959、150.293和698.476,均P0.01)。4组PC12细胞线粒体膜电位的差异均有统计学意义(F值为24.989,P0.01)。4组大鼠自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Atg5和p62表达的差异均有统计学意义(F值分别为235.319、110.490和36.311,均P0.01)。4组大鼠神经功能评分的差异有统计学意义(F值25.550,P0.01)。(2)与假手术组比较,SAH后p38、磷酸化p38和DJ-1蛋白表达均显著上调(分别为0.43±0.06、0.41±0.02和0.07±0.01上升至0.61±0.08、0.79±0.07和0.17±0.03,均P0.01),线粒体膜电位去极化(8.29±0.28上升至9.23±0.42,P0.01);Atg5蛋白表达上调及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ升高(分别为0.23±0.04和0.25±0.04上升至0.47±0.04和0.46±0.04,均P0.01),p62蛋白表达下调(1.09±0.14下降至0.54±0.10,P0.01);神经功能评分降低[(17.5±0.6)分降至(11.3±2.7)分,P0.01]。p38抑制剂显著下调SAH后磷酸化p38蛋白表达(0.79±0.07降至0.47±0.04,P0.01),上调DJ-1蛋白表达(0.17±0.03上升至1.02±0.06,P0.01),线粒体膜电位恢复(9.23±0.42降低至8.47±0.36,P0.01),细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Atg5表达上调(分别为0.46±0.04、0.47±0.04上调为0.77±0.06、0.95±0.12,均P0.01),P62表达变为SAH水平(0.57±0.09变为0.54±0.10,P=0.650),神经功能评分得到显著升高[(11.3±2.7)分上升至(15.5±1.0)分,P0.01)]。结论 SAH后,p38抑制剂下调磷酸化p38活性后可能通过上调DJ-1蛋白表达,抑制异常自噬,维持线粒体功能,进而发挥神经保护功能。
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