T-bet基因传递对支气管哮喘模型小鼠T淋巴细胞亚群的免疫调节作用

目的 应用携带T-bet基因的重组腺相关病毒载体(rAAV-T-bet)经鼻干预支气管哮喘(哮喘)小鼠模型,探讨T-bet基因传递对哮喘小鼠T淋巴细胞亚群的免疫调节及改善炎症的作用.方法 采用随机数字表法将40只健康的6～8周龄SPF级Balb/c小鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、rAAV介导的增强型绿色荧光蛋白(rAAV-eGFP)干预对照组(C组)及rAAV-T-bet干预组(D组),每组10只.B、C、D组以卵清蛋白(OVA)致敏和激发,建立哮喘小鼠模型,其中C、D组在第18、19天分别经鼻滴入等剂量rAAV-eGFP、rAAV-T-bet进行干预；B组处理方法同上,以等剂量的9 g/L盐水干预.于最后一次激发24 h后处死小鼠并取材.应用免疫组织化学方法观察小鼠肺组织中转录因子T-bet、GATA-3和Foxp3水平；计数BALF中细胞总数并分析其细胞类型；ELISA法测定BALF中细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-5表达水平.结果1.B组、C组中T-bet表达细胞的阳性率均明显低于A组(P均＜0.05),GATA-3表达细胞的阳性率明显高于A组(P均＜0.05),D组中T-bet表达明显增强,GATA-3表达则显著下降(P均＜0.05),Foxp3的表达阳性率在各组间的差异与T-bet的表达类似.2.D组BALF中细胞总数为(0.35±0.11)×109/L,其中EOS比例为0.04±0.02,虽高于A组,但明显低于B、C组(P均＜0.05)；IL-4和IL-5分别为(158±55) ng/L、(68±22) ng/L,显著低于B、C组(P均＜0.05),高于A组但差异无统计学意义(P均＞0.05),而IFL-γ水平[(113±35) ng/L]明显低于B、C组(P均＜0.05),与A组比较水平相近(P＞0.05).结论 在建立小鼠哮喘模型的基础上,经鼻应用rAAV-T-bet干预可使T-bet基因顺利定向插入到受转染细胞的基因组中,成功编码T-bet蛋白,并进一步对哮喘小鼠模型发挥相应的免疫调节作用.

Immunoregulation effect of transmission of T-bet gene on T cell subgroups in asthmatic Balb/c mice