| 重组肉毒毒素E(BoNT/E)重链C端的表达、纯化及其抗原性分析 |
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| 引用本文： | 贾宏丽,杨利敏,王景林,康琳,王利春,孙嗣梅. 重组肉毒毒素E(BoNT/E)重链C端的表达、纯化及其抗原性分析[J]. 军事医学科学院院刊, 2004, 28(5): 417-419,423 |
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| 作者姓名： | 贾宏丽 杨利敏 王景林 康琳 王利春 孙嗣梅 |
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| 作者单位： | 1. 军事医学科学院微生物流行病研究所,北京,100071
2. 内蒙古大学生命科学学院生物系,呼和浩特,010021 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 (3 0 3 70 0 81) |
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| 摘 要： | 目的：克隆、表达并纯化肉毒毒素E重链C端(BoNT／EHC2)保护性抗原片段，为BoNT／E的抗体制备和检测方法的建立奠定基础。方法：采用PCR扩增BoNT／EHc2基因，插入表达载体pET28a，转化E．coli BL2l(DE3)pLysS获得表达工程菌株，并对诱导表达条件和纯化条件进行优化。利用Western印迹和间接ELISA方法鉴定rBoNT／EHc2的抗原性。结果：表达工程菌pEq28a-EHC2／BL21(DE3)pLysS于37℃用0．2mmol／L IPTG诱导6h，表达的目的蛋白可以达到全茵蛋白的37．9％。经过固定化金属螯合亲和层析一步纯化，rBoNT／EHC2的纯度可达95％以上。Western印迹和间接ELISA显示其具有良好的抗原性。结论：首次克隆、表达并纯化了BoNT／EHC2片段，并可被抗天然BoNT／E马血清所识别，为制备相应的抗体及建立快速检测方法做好了准备。
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| 关 键 词： | 肉毒毒素E 克隆 表达 固定化金属螯合亲和层析（IMAC） 抗原性 |
| 文章编号： | 1000-5501(2004)05-0417-04 |
Expression,purification and antigenicity of recombinant C-terminal fragment of botulinum neurotoxin type E(BoNT/E)heavy chain |
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| JIA Hong-Li ,YANG Li-Min ,WANG Jing-Lin ,KANG L in ,WANG Li-Chun ,SUN Si-Mei. Expression,purification and antigenicity of recombinant C-terminal fragment of botulinum neurotoxin type E(BoNT/E)heavy chain[J]. Bulletin of the Academy of Military Medical Sciences, 2004, 28(5): 417-419,423 |
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| Authors: | JIA Hong-Li YANG Li-Min WANG Jing-Lin KANG L in WANG Li-Chun SUN Si-Mei |
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| Affiliation: | JIA Hong-Li 1,YANG Li-Min 2,WANG Jing-Lin 1*,KANG L in 1,WANG Li-Chun 2,SUN Si-Mei 1 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | BoNT/E cloning expression immobilized me tal-chelating affinity chromatography antigenicity |
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