| 一种人神经母细胞瘤辅酶II-依赖性视黄醇脱氢酶cDNA的克隆及特征分析 |
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| 引用本文： | 李一凡,刘戈飞,宋旭红,杜昆,黄东阳.一种人神经母细胞瘤辅酶II-依赖性视黄醇脱氢酶cDNA的克隆及特征分析[J].癌变．畸变．突变,2005(6). |
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| 作者姓名： | 李一凡 刘戈飞 宋旭红 杜昆 黄东阳 |
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| 作者单位： | 汕头大学医学院分子生物学中心 广东汕头515041
(李一凡，刘戈飞，宋旭红，杜昆)，汕头大学医学院分子生物学中心 广东汕头515041(黄东阳) |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助(No:30470396)，广东省自然科学基金(No.021221) |
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| 摘 要： | 背景与目的:检测神经母细胞瘤中新的辅酶II_依赖性视黄醇脱氢/还原酶NADP(H)_dependen tretinold ehydrogenase/reductase,NRDR]选择性剪接亚型。材料与方法:我们用NRDR特异引物,从人神经母细胞瘤细胞系SK_N_SH和SK_SY_5YcDNA中分别经PCR扩增出635bp和429bpDNA片段,测序证实635bp片段是NRDR,而429bp片段是选择性剪接新亚型。再用快速cDNA末端扩增(Rapidamplification of cDN Aends,RACE)方法得到429bp片段cDNA全长序列。用绿色荧光蛋白与新亚型的融合蛋白做亚细胞定位。结果:得到新亚型全长并命名为humanNRDRA2(hum NRDRA2)(AY616182)。已知NRDR有8个外显子,而新亚型hum NRDRA2由选择性剪接造成了第4和第6外显子丢失,从第5外显子开始读码框架前移1bp,导致随后的编码区框码漂移(frameshift),同时蛋白翻译终止信号提前出现,产生仅有188个氨基酸的蛋白,其中第137氨基酸以后的序列相对于NRDR完全发生改变,同时C_末端的过氧化物酶体定位信号_SRL丢失,却在160～176氨基酸处出现了一个细胞核定位信号。我们在ESTs库中未找到与其相同的剪接形式,提示它可能是神经母细胞瘤特有的一种NRDR剪接亚型。用GFP_NRDRA2融合蛋白做该蛋白的亚细胞定位,发现发绿色荧光的细胞均已悬浮,但悬浮状态不佳,而作为对照的NRDR另一亚型则能定位成功,提示NRDRA2蛋白可能具有一定的细胞毒性。结论:人神经母细胞瘤NRDRA2选择性剪接亚型羧基端框移突变并有核定位序列;该蛋白可能是一种细胞毒性蛋白。
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| 关 键 词： | NADP(H)-依赖的视黄醇脱氢酶 选择性剪接 框移突变 |
cDNA Cloning of a Short Isoform of Human Neurobla stoma NADP(H)-Dependent Retinol Dehydrogenase/Reductase and Analysis of Its Chara cteristics |
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| LI Yi-fan,LIU Ge-fei,SONG Xu-hong,DU kun,HUANG Dong-yang.cDNA Cloning of a Short Isoform of Human Neurobla stoma NADP(H)-Dependent Retinol Dehydrogenase/Reductase and Analysis of Its Chara cteristics[J].Carcinogenesis,Teratogenesis and Mutagenesis,2005(6). |
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| Authors: | LI Yi-fan LIU Ge-fei SONG Xu-hong DU kun HUANG Dong-yang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | NADP(H)-dependent retinol dehydrogenase/reductase alternative splicing frameshift |
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