结核杆菌Hsp65和Esat-6基因共表达质粒的构建和表达

目的：构建pIHsp65-Esat6双顺反子真核表达质粒并在真核细胞中表达，以进一步了解两者共同表达在体内的免疫保护力。方法：实验于2006-12／2007-05在暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室完成。以结核分枝杆菌H37Rv株基因组为模扳经聚合酶链反应分别扩增出Hsp65和Esat-6基因，分别克隆到真核表达载体pIRES的多克隆位点A和B中，构建pIHsp65-Esat6真核表达质粒，并转染HepG-2细胞中表达和检测。结果：酶切鉴定提示插入的基因片段分别为1．64kb和0．31kb，测序分析表明克隆的Hsp65和Esat6序列与GenBank上公布序列完全一致；反转录-聚合酶链反应分别检测到Hsp65和Esat-6两基因mRNA转录，表达的蛋白Mr分别为65000和10500。结论：成功构建和表达pIHsp65-Esat6质粒。