| 胰腺癌石蜡包埋组织中微RNA原位杂交检测技术的优化 |
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| 引用本文： | 倪晨明,倪灿荣,金钢,焦莉娟,李连峰,郑建明. 胰腺癌石蜡包埋组织中微RNA原位杂交检测技术的优化[J]. 第二军医大学学报, 2018, 39(12): 1375-1380 |
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| 作者姓名： | 倪晨明 倪灿荣 金钢 焦莉娟 李连峰 郑建明 |
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| 作者单位： | 1. 海军军医大学(第二军医大学)长海医院胰腺外科, 上海 200433;2. 海军军医大学(第二军医大学)长海医院病理科, 上海 200433*通信作者 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（81172077）,上海市卫生计生系统重要薄弱学科建设项目（2015ZB0202）. |
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| 摘 要： | 目的 对采用原位杂交检测10%中性甲醛溶液固定的石蜡包埋（FFPE）胰腺癌组织切片中微RNA（miR）的方法进行技术优化,以提高miR的阳性检出率。方法 将20例胰腺癌组织标本构建成组织芯片,使用锁核酸（LNA）标记的探针和显色原位杂交技术检测miR-21和miR-34a的表达。杂交温度分别设为48℃、53℃、56℃,杂交后采用3种不同的洗涤条件（温度、时间和3种不同洗涤缓冲液）进行杂交条件优化。将126例胰腺癌组织标本制成组织芯片,采用优化的显色原位杂交技术检测miR-21和miR-34a的表达。结果 miR-21探针最佳杂交条件为杂交温度53℃下杂交6 h,使用洗涤缓冲液Ⅲ在65℃下洗涤6 min,再用PBS洗涤1 min;miR-34a探针最佳杂交条件为杂交温度53℃下杂交6 h,使用洗涤缓冲液Ⅲ分别在4℃和65℃下洗涤6 min,再用PBS洗涤1 min。在126例胰腺癌组织中,84例（66.7%）miR-21表达阳性,77例（61.1%）miR-34a表达阳性。结论 在FFPE胰腺癌组织切片中,miR-21和miR-34a的最佳杂交温度均为53℃,选择合适的杂交后洗涤温度和洗涤缓冲液有利于提高miR的阳性检出率。
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| 关 键 词： | 原位杂交 微RNA 组织微阵列 胰腺肿瘤 杂交温度 |
| 收稿时间： | 2018-09-16 |
| 修稿时间： | 2018-12-07 |
Optimization of in situ hybridization for detecting microRNA in paraffin-embedded pancreatic cancer tissue sections |
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| NI Chen-ming,NI Can-rong,JIN Gang,JIAO Li-juan,LI Lian-feng and ZHENG Jian-ming. Optimization of in situ hybridization for detecting microRNA in paraffin-embedded pancreatic cancer tissue sections[J]. Former Academic Journal of Second Military Medical University, 2018, 39(12): 1375-1380 |
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| Authors: | NI Chen-ming NI Can-rong JIN Gang JIAO Li-juan LI Lian-feng ZHENG Jian-ming |
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| Affiliation: | 1. Department of Pancreatic Surgery, Changhai Hospital, Navy Medical University(Second Military Medical University), Shanghai 200433, China;2. Department of Pathology, Changhai Hospital, Navy Medical University(Second Military Medical University), Shanghai 200433, China*Corresponding authors |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | in situ hybridization microRNAs tissue microarray pancreatic neoplasms hybridization temperature |
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