氮溴化丙锭与聚合酶链反应结合的细菌活细胞检测方法

目的:区分细菌PCR过程中的死活菌。方法:使用叠氮溴化丙锭(PMA)处理提取样品的基因,使样品中死细胞的DNA分子与PMA发生共价交联,使其DNA分子的PCR扩增被抑制。结果:当浊度<10 NTU时,对死细胞DNA的PCR扩增,PMA具备的抑制效用仍然有效;当浊度>100 NTU时,PMA的抑制效果就会失去。而当样品中的PMA质量浓度>3μg/ml时,曝光时间就会超过3 min,PMA可对死细胞DNA的PCR扩增进行抑制;PMA质量浓度>50μg/ml时,活细胞DNA的PCR扩增就会受到影响。结论:对异丙醇处理、热处理引起的细菌细胞膜破裂而产生的死细胞,可通过PMA与PCR结合的方法进行选择性地检测,能较好的区分死活菌。