HCV 5′NCR和结构蛋白编码序列的克隆及对PA317细胞的转染 |
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引用本文: | 傅涌水,吕凌,王斌.HCV 5′NCR和结构蛋白编码序列的克隆及对PA317细胞的转染[J].中华传染病杂志,1998,16(3):317. |
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作者姓名: | 傅涌水 吕凌 王斌 |
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作者单位: | 中山医科大学分子医学研究中心实验室 |
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摘 要: | 目的进一步研究丙型肝炎病毒5′NCR对结构蛋白编码基因的表达调控。方法以拼接好的HCV5′NCR,C,E1和E2/NS1区基因共长2547个核苷酸片段克隆于逆转录病毒载体LNSX得重组体pLHC2547,用聚合酶链反应(PCR)及核苷酸序列分析等方法对重组体进行鉴定。通过磷酸钙-DNA共沉淀法把经鉴定的重组体转染入PA317细胞,用G418进行克隆筛选,以NIH3T3细胞测其病毒滴度。提取转染细胞DNA及培养上清RNA分别用PCR和逆转录PCR进行鉴定。结果培养上清的病毒滴度为2×105CFU/ml,PCR及逆转录PCR(RT-PCR)分别可以从转染的细胞DNA及培养上清中扩增出HCV的基因片段。结论目的基因已整合到细胞的基因组中并得以表达
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关 键 词: | 克隆.分子 肝炎病毒.丙型 逆转录病毒 转染 |
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