秋菊丸化学成分鉴定及靶向GLUT9-OAT3尿酸转运体介导慢性高尿酸血症大鼠尿酸代谢和肾保护的机制研究

目的 初步明确秋菊丸化学成分，研究秋菊丸对慢性高尿酸血症（HUA）模型大鼠尿酸（UA）升高及肾脏损伤的治疗作用及机制。方法 借助超高效液相色谱串联四极杆静电场轨道阱质谱（UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS）技术，初步鉴定秋菊丸的化学成分。48只雄性SD大鼠随机分成对照组、模型组、苯溴马隆（5.45 mg·kg^-1，阳性药）组和秋菊丸低、中、高剂量（1.31、2.62、5.24 g·kg^-1）组，除对照组外，通过ig腺嘌呤和乙胺丁醇制备大鼠慢性HUA模型，造模同时每天ig给药1次，连续28 d。使用全自动生化仪测定大鼠血清UA、肌酐（CRE）、尿素氮（BUN）水平；HE及Masson染色观察肾脏组织病理学变化；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测肾脏组织中葡萄糖转运蛋白9 （GLUT9）、有机阴离子转运体家族蛋白3 （OAT3）、ATP结合盒亚家族G成员2（ABCG2）、转化生长因子-β（TGF-β1）、SMAD蛋白3（Smad3）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的mRNA水平。结果 秋菊丸中共鉴定出41个成分，包括黄酮类（9个）、有机酸类（5个）、生物碱类（3个）、苯丙素类（7个）、香豆素类（1个）、酚类（3个）、呋喃类（2个）、脂肪酰类（6个）、醌类（2个）、萜类（1个）、内酯类（1个）、脂肪酸类（1个）。给药28 d后，HE染色结果表明，与模型组比较，各给药组肾损伤的病理学改变明显恢复，减轻了肾小球萎缩、肾小管扩张、肾纤维化及肾间质炎性细胞浸润等病理改变，其中秋菊丸高剂量组及苯溴马隆组肾脏损伤最轻。与模型组比较，秋菊丸高剂量组的CRE、UA水平均显著降低（P＜0.01），各剂量组BUN水平有降低趋势，但无显著性差异；高、中剂量组肾组织中肾小管上皮细胞中胶原蛋白的含量显著降低（P＜0.05、0.01）；高剂量组GLUT9 mRNA表达量显著减少（P＜0.05、0.01），各剂量组OAT3、ABCG2的mRNA表达量均显著增加（P＜0.05、0.01）；中、高剂量α-SMA mRNA表达量显著减少（P＜0.05、0.01），高剂量组TGF-β1 mRNA表达量显著减少（P＜0.01），各给药组Smad3的mRNA表达量有减少趋势，但无显著性差异。结论 初步明确秋菊丸化成成分，秋菊丸具有增强UA代谢、减轻HUA所致肾脏损伤及肾纤维化的作用，其机制可能与调控GLUT9-OAT3尿酸转运体相关。

Identification of chemical constituents of Qiuju Wan and study on mechanism of targeting GLUT9-OAT3 uric acid transporter mediating uric acid metabolism and renal protection in chronic hyperuricemia rats