大鼠视网膜与视皮层神经元原代培养方法学特点的比较

背景：神经元的原代培养是进行神经系统结构和功能研究的一种重要手段。如果能建立稳定良好的视网膜、视皮层神经细胞体外培养体系，对深入研究其各种细胞成分的生物学功能、病理改变过程与机制以及药物反应等十分重要。目的：原代培养新生大鼠视网膜及视皮层神经元并比较二者特点，探求最佳分离和培养方法，为相关性眼病的临床基础研究提供实验模型。设计、时间及地点：神经细胞原代培养。于2007-02/2008-03在中南大学湘雅医院实验中心、湖南师范大学生命科学学院完成。材料：出生1~3d清洁级SD大鼠。方法：分别采用机械分离及酶消化法分离新生大鼠视网膜及视皮层神经元，应用含10%新生牛血清、10%F-12 Nutrient Mixtures的DMEM培养基进行接种培养，含2% B-27 Serum-Free Supplements的Neurobasal Medium进行维持培养，利用尼氏染色进行神经元鉴定。主要观察指标：培养视网膜及视皮层神经元，尼氏染色显示神经元比例。结果：培养的神经元生长良好，胞体饱满，突起长。尼氏染色示视网膜神经元比例大于90%，视皮层神经元比例大于50%。结论：视网膜及视皮层神经元培养方法及生长特点存在不同，需采用不同的方法进行培养以获得高纯度的神经元。