奥氮平连续处理后大鼠中缝背核组织差异表达蛋白的生物信息学分析

目的分析奥氮平连续处理的大鼠中缝背核蛋白的差异表达，探究奥氮平使用早期导致代谢障碍可能的中枢5-HT机制。方法将40只SD大鼠随机分配到奥氮平组[灌胃奥氮平1.2 mg/(kg· d）]和对照组（灌胃等量0.9%氯化钠溶液），两组各分配10只雌性大鼠、10只雄性大鼠。给药1次/d，连续28 d。最后一次给药1 h后处理大鼠，并取大脑中缝背核样本。利用绝对和相对定量同位素标记技术联合液相色谱-串联质谱技术对大鼠中缝背核组织进行蛋白质组学分析，进一步对差异表达蛋白进行GO、KEGG通路、COG、蛋白互作网络分析。另将24只大鼠随机分为4组：2个奥氮平组和2个对照组（6只/组），类似方法得到大鼠中缝背核样本，根据蛋白质组学数据选择目标基因的表达进行qRT-PCR和Western blot验证。结果筛选出奥氮平组与对照组大鼠中缝背核差异表达蛋白有72种上调、142种下调。GO注释分析显示，涉及奥氮平的差异表达蛋白参与细胞过程、生物调节、代谢过程、应激反应、多细胞生物过程以及结合、催化活性、分子功能调节、转录调节活性等分子功能。KEGG富集分析显示，涉及奥氮平的差异表达蛋白主要参与流体剪切应力与动脉粥样硬化、5-羟色胺能突触、丁酸代谢、甲状腺激素合成和IL-17信号通路等；PPI分析显示，涉及奥氮平的差异表达蛋白Hmgcs2、Cav1、Hsp90b1、Canx、Gnai1、MAPK9和LOC685513(Gng14）位于蛋白质互作网络的节点。qRT-PCR和Western blot结果显示，丁酸代谢和5-羟色胺(5-HT）能突触通路4个基因及其蛋白，其中丁酸代谢的关键调节基因Hmgcs2及其蛋白在药物处理组明显下调（P < 0.01），5-羟色胺2受体调控的Slc6a4、Gnai1基因及其蛋白在药物处理组均出现显著高表达（P < 0.05）。结论奥氮平使用早期可能主要通过调控中缝背核组织Hmgcs2、Cav1、Hsp90b1、Canx、Gnai1、Slc6a4、MAPK9和Gng14等差异表达蛋白以及5-HT能突触通路等，参与大鼠机体代谢障碍的中枢5-HT作用机制。