| 钠通道SCN1A基因短发夹RNA表达质粒的构建及其在HEK293细胞中的沉默效果 |
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| 引用本文： | 龙跃生,孙卫文,赵绮华,曾涛,廖卫平. 钠通道SCN1A基因短发夹RNA表达质粒的构建及其在HEK293细胞中的沉默效果[J]. 南华大学学报(医学版), 2009, 37(3): 257-260 |
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| 作者姓名： | 龙跃生 孙卫文 赵绮华 曾涛 廖卫平 |
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| 作者单位： | 广州医学院,第二附属医院,神经科学研究所,广东,广州,510260 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目，广东省自然科学基金项目 |
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| 摘 要： | 目的采用人SCN1A基因非保守区DNA构建短发夹RNA（shRNA）稳定表达的重组质粒,在HEK293细胞中抑制SCN1A基因表达。方法PCR分别正反向扩增SCN1A基因特异序列,构建成一个绿色光蛋白（GFP）与发夹结构RNA（shRNA）融合表达的重组质粒pEGFP-SCN1A-shRNA;该质粒和对照质粒（pCMV-EGFP）分别与SCN1A基因表达质粒（pCMV-SCN1A）共转染HEK293细胞株,采用半定量RT-PCR及双荧光共定位法鉴定SCN1A基因的表达情况。结果与对照相比较,shRNA表达质粒转染的培养细胞中SCN1A基因mR-NA表达量下调90%;双荧光共定位显示实验组阳性细胞中只检测到GFP蛋白,未能检测到Nav1.1,而对照组阳性细胞中能同时检测到GFP蛋白和Nav1.1。结论shRNA表达质粒在培养细胞中能有效地抑制SCN1A基因的表达。该质粒可进一步改造成腺病毒表达载体,在动物脑组织中进行永久性表达,建立癫痫等神经系统疾病的动物模型,可望成为致病机理研究和开发新治疗途径的工具。
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| 关 键 词： | RNA干扰 钠通道 癫痫 |
Construction of the Vector Expressing SCN1A Short-hairpin RNA and Silencing Gene Expression in HEK293 Cell |
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| Affiliation: | LONG Yue -sheng, SUN Wei -wen, ZHAO Qi -hua, et al ( Institute of Neuroscience and the Second Affiliated Hospital of Guangzhou Medical College, Guangzhou , Guangdong 510260, China ) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RNA interference sodium channel epilepsy |
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