| 口蹄疫病毒非结构蛋白3D单克隆抗体的制备及鉴定 |
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| 引用本文： | 田美娜,李永亮,卢曾军,付元芳,袁明,刘湘涛,刘在新.口蹄疫病毒非结构蛋白3D单克隆抗体的制备及鉴定[J].细胞与分子免疫学杂志,2009,25(7). |
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| 作者姓名： | 田美娜 李永亮 卢曾军 付元芳 袁明 刘湘涛 刘在新 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部畜禽病毒学重点实验室,国家口蹄疫参考实验室,甘肃,兰州,730046
2. 河北畜牧良种工作站,河北,石家庄,050061 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973)资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:制备并鉴定口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3D的单克隆抗体(mAb).方法:以纯化的原核表达3D蛋白免疫BALB/c小鼠, 取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合, 杂交瘤细胞经间接ELISA法筛选, 有限稀释法克隆, 直至所克隆的细胞能够100%的分泌抗体, 用Western blot以及间接免疫荧光法对mAbs的特异性等进行鉴定.结果:免疫的BALB/c小鼠经过多次融合筛选, 共获得5株抗pET28a-3D的mAb, 其亚类鉴定3株为IgG1 , 2株为IgG2b, 初步判定所得5株mAb识别2个不同表位.Western blot显示这些mAbs与重组3D蛋白和FMDV O/China99感染的BHK-21细胞中的3D抗原均特异性结合, 免疫荧光结果显示这5株mAb能够特异结合FMDV感染细胞中的3D蛋白.结论:成功获得了能识别自然3D蛋白的特异性mAb , 为进一步研究3D蛋白的结构和功能以及诊断方法奠定基础.
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| 关 键 词： | 口蹄疫病毒 非结构蛋白3D 单克隆抗体 原核表达 |
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