缺氧对培养的人视网膜色素上皮细胞中血管生成素-2表达的影响

背景脉络膜新生血管（CNV）是导致一些眼底疾病视力丧失的主要原因，而血管生成素2（Ang-2）与血管生成的关系较为密切。目前在缺氧条件下人视网膜色素上皮（RPE）细胞上Ang-2的表达情况与CNV发病的关系研究较少。目的观察缺氧对体外培养的人RPE细胞中Ang．2表达的影响，探讨Ang-2在CNV形成中的可能作用。方法人RPE细胞经培养和传代，取第4～7代细胞以5×10^7个／L密度接种于培养皿，常氧对照组不加CoCl2，缺氧组换以含终浓度为200μmol／LCoCl2的培养基5ml建立RPE细胞化学缺氧模型，分别于加药导致缺氧后0．5、1、2、4、6、12和24h终止缺氧。采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测缺氧不同时间对体外培养的人RPE细胞Ang-2mRNA表达的影响；采用酶联免疫吸附反应（ELISA）法检测缺氧不同时间对体外培养的人RPE细胞上清液中Ang-2蛋白质量浓度的影响。结果人RPE细胞复苏后存活率达90％，第4代传代细胞中色素很少，细胞形态多为梭形。不同培养条件组人RPE细胞中Ang-2mRNA／β-actin mRNA值的总体比较差异有统计学意义（F=1086．30，P=0．00）；缺氧条件下培养0．5h后人RPE细胞中Ang-2mRNA／β-actin mRNA值开始明显增加，至缺氧培养后4～6h达高峰，与常氧对照组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；缺氧培养24h后Ang-2mRNA／β-actin mRNA值接近常氧对照组。ELISA分析结果表明，不同培养条件下人RPE细胞培养基上清液中Ang-2蛋白的总体比较差异有统计学意义（F=1034．00，P=0．00），缺氧条件下培养0．5h后人RPE细胞中Ang-2蛋白的质量浓度开始明显升高，6h达到高峰，与常氧对照组相比，差异均有统计学意义（P〈0．05）；缺氧培养24h后Ang-2蛋白的质量浓度接近常氧对照组。结论缺氧可显著上调体外培养的人RPE细胞中Ang-2的表达，Ang-2于缺氧早期呈高表达，提示Ang-2参与了CNV的形成，可能在CNV形成过程的早期阶段发挥作用。

Effect of hypoxia on expression of angiopoietin-2 in human retinal pigment epithelium