| 重组人碱性成纤维细胞生长因子突变体[Ser~(69,87)]的表达、纯化及其稳定性研究 |
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| 引用本文： | 吴晓萍, 冯辉, 李校堃, 苏志坚, 郑青, 黄亚东. 重组人碱性成纤维细胞生长因子突变体[Ser~(69,87)]的表达、纯化及其稳定性研究[J]. 中国药科大学学报, 2005, 36(2): 168-172. |
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| 作者姓名： | 吴晓萍 冯辉 李校堃 苏志坚 郑青 黄亚东 |
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| 作者单位： | 1.暨南大学医药生物技术研究开发中心 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)，国家科技攻关项目 |
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| 摘 要： | 目的:对野生型人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)进行突变改造以提高其稳定性。方法:采用PCR突变方法,将hbFGFcDNA第6 9位和87位的Cys密码子突变为Ser密码子,所得的突变片断插入表达载体pET3c的表达框架中,构建了表达菌株BL2 1(DE3) /pET3c [Ser69,87]hbFGF ,IPTG诱导表达。通过离子交换、肝素亲和两步层析的方法分离纯化突变体蛋白[Ser69,87]hbFGF。MTT法测定重组蛋白的促分裂活性。并对突变体蛋白的抗蛋白酶水解能力、热稳定性及其酸碱稳定性进行了检测。结果:所构建的表达菌株,其[Ser69,87]hbFGF的表达量占菌体总蛋白的30 %以上。经两步层析纯化,获得了纯度达98%的突变体[Ser69,87]hbFGF。纯化的样品促Balb/c 3T3细胞增殖的活性与野生型hbFGF相当。突变体[Ser69,87]hbFGF抗胰蛋白酶水解的能力较野生型hbFGF强;热稳定性和酸碱稳定性也较野生型hbFGF高。结论:突变体[Ser69,87]hbFGF的生物学活性与野生型hbFGF相当,其稳定性明显高于野生型hbFGF。
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| 关 键 词： | 人碱性成纤维细胞生长因子 突变体 稳定性 |
| 文章编号： | 1000-5048(2005)02-0168-05 |
| 修稿时间： | 2004-06-17 |
Study on Expression,Purification,and Stability of Recombinant Human Basic Fibroblast Growth Factor Mutant, [Ser69,87] hbFGF |
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| WU Xiao-Ping,FENG Hui,LI Xiao-Kun,SU Zhi-Jian,ZHENG Qing,HUANG Ya-Dong. Study on Expression,Purification,and Stability of Recombinant Human Basic Fibroblast Growth Factor Mutant, [Ser69,87] hbFGF[J]. Journal of China Pharmaceutical University, 2005, 36(2): 168-172 |
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| Authors: | WU Xiao-Ping FENG Hui LI Xiao-Kun SU Zhi-Jian ZHENG Qing HUANG Ya-Dong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Human basic fibroblast growth factor Mutant Stabi lity |
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