| 重组人碱性成纤维细胞生长因子突变体[Ser~(69,87)]的表达、纯化及其稳定性研究 |
| |
| 引用本文： | 吴晓萍,冯辉,李校堃,苏志坚,郑青,黄亚东.重组人碱性成纤维细胞生长因子突变体[Ser~(69,87)]的表达、纯化及其稳定性研究[J].中国药科大学学报,2005,36(2):168-172. |
| |
| 作者姓名： | 吴晓萍 冯辉 李校堃 苏志坚 郑青 黄亚东 |
| |
| 作者单位： | 暨南大学医药生物技术研究开发中心,广州,510632 |
| |
| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)，国家科技攻关项目 |
| |
| 摘 要： | 目的:对野生型人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)进行突变改造以提高其稳定性.方法:采用PCR突变方法,将hbFGF cDNA第69位和87位的Cys密码子突变为Ser密码子,所得的突变片断插入表达载体pET3c的表达框架中,构建了表达菌株BL21(DE3)/pET3c-Ser69,87]hbFGF,IPTG诱导表达.通过离子交换、肝素亲和两步层析的方法分离纯化突变体蛋白Ser 69,87]hbFGF.MTT法测定重组蛋白的促分裂活性.并对突变体蛋白的抗蛋白酶水解能力、热稳定性及其酸碱稳定性进行了检测.结果:所构建的表达菌株,其Ser69,87]hbFGF的表达量占菌体总蛋白的30%以上.经两步层析纯化,获得了纯度达98%的突变体Ser69,87]hbFGF.纯化的样品促Balb/c 3T3细胞增殖的活性与野生型hbFGF相当.突变体Ser69,87]hbFGF抗胰蛋白酶水解的能力较野生型hbFGF强;热稳定性和酸碱稳定性也较野生型hbFGF高.结论:突变体Ser69,87]hbFGF的生物学活性与野生型hbFGF相当,其稳定性明显高于野生型hbFGF.
|
| 关 键 词： | 人碱性成纤维细胞生长因子 突变体 稳定性 |
| 文章编号： | 1000-5048(2005)02-0168-05 |
| 修稿时间： | 2004年6月17日 |
Study on Expression,Purification,and Stability of Recombinant Human Basic Fibroblast Growth Factor Mutant, [Ser69,87] hbFGF |
| |
| WU Xiao-Ping,FENG Hui,LI Xiao-Kun,SU Zhi-Jian,ZHENG Qing,HUANG Ya-Dong.Study on Expression,Purification,and Stability of Recombinant Human Basic Fibroblast Growth Factor Mutant, [Ser69,87] hbFGF[J].Journal of China Pharmaceutical University,2005,36(2):168-172. |
| |
| Authors: | WU Xiao-Ping FENG Hui LI Xiao-Kun SU Zhi-Jian ZHENG Qing HUANG Ya-Dong |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Human basic fibroblast growth factor Mutant Stabi lity |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《中国药科大学学报》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《中国药科大学学报》下载免费的PDF全文 |
|
