茶多酚通过miR-33a-5p/RUNX2介导人牙槽骨成骨细胞增殖和凋亡

摘要：目的:探讨茶多酚对人牙槽骨成骨细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法:分离培养人牙槽骨成骨细胞,用含0.000 1～100μg·ml-1茶多酚的DMEM培养基培养人牙槽骨成骨细胞,记为不同浓度茶多酚处理组,用不含茶多酚的正常培养基培养的细胞作为对照组;将pcDNA3.1-NC、pcDNA3.1-RUNX2、anti-NC、anti-miR-33a-5p、mimics-NC、miR-33a-5p分别转染至人牙槽骨成骨细胞中,记为pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-RUNX2组、anti-NC组、anti-miR-33a-5p组、mimics-NC组、miR-33a-5p组。细胞计数试剂盒8（CCK-8）检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹（Western blot）法检测细胞增殖核抗原Ki67（Ki-67）、增殖细胞核抗原（PCNA）、B细胞淋巴瘤/白血病-2 （Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、runt相关转录因子2（RUNX2）蛋白表达;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-33a-5p和RUNX2 m RNA表达;荧光素酶报告实验检测miR-33a-5p对RUNX2的靶向调控。结果:各浓度茶多酚处理的人牙槽骨成骨细胞的细胞活力显著升高,凋亡率显著降低（P<0.05）,其中茶多酚浓度为1μg·ml-1处细胞活力和凋亡率达到极值;1μg·ml-1茶多酚处理的成骨细胞中Ki-67、PCNA、Bcl-2水平及RUNX2 m RNA和蛋白表达水平显著升高,Bax和miR-33a-5p水平显著降低（P<0.05）。过表达RUNX2或抑制miR-33a-5p表达,细胞活力及Ki-67、PCNA、Bcl-2水平显著升高,细胞凋亡率和Bax水平显著降低（P<0.05）。miR-33a-5p靶向负调控RUNX2。结论:茶多酚可能通过miR-33a-5p/RUNX2轴促进人牙槽骨成骨细胞增殖,抑制细胞凋亡。