| 人BIGH3基因克隆表达对兔角膜基质细胞黏附和迁移的影响 |
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| 引用本文： | 葛红岩,石妍,杨帆,张毅,刘平,刘含若.人BIGH3基因克隆表达对兔角膜基质细胞黏附和迁移的影响[J].中国组织工程研究与临床康复,2010,14(50). |
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| 作者姓名： | 葛红岩 石妍 杨帆 张毅 刘平 刘含若 |
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| 基金项目： | 黑龙江省攻关课题，哈医大一院院基金，黑龙江省教育厅 |
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| 摘 要： | 背景:BIGH3蛋白位于角膜上皮和基质层,在基质层高表达,先前研究已经发现BIGH3蛋白能促进角膜上皮创伤愈合,为此进一步探讨其对角膜基质创伤愈合的影响.目的:构建人BIGH3基因的原核表达载体,观察其对角膜细胞与细胞外基质黏附和迁移的作用.方法:PCR扩增BIGH3基因的ORF阅读框,并通过Kpn Ⅰ和Sal Ⅰ插入到原核表达载体pET32a(+)中.经PCR、酶切和序列测定方法鉴定重组质粒.将重组质粒转入BL21(DE3)表达,IPTG诱导表达人BIGH3融合蛋白,并进行SDS-PAGE电泳分析和Western blot检测分析:以Ni-NTA树脂对蛋白纯化与复性,作用于体外培养的兔角膜细胞,用MTT法分析其对细胞与细胞外基质黏附的影响,采用改良的Boyden微孔膜双槽法观察BIGH3蛋白对角膜细胞迁移的影响.结果与结论:重组质粒经PCR、酶切与DNA测序证实插入了pET32a(+)载体中.通过IPTG诱导,成功的表达融合蛋白在包涵体中,经SDS-PAGE电泳分析,出现了一条新生的蛋白条带,Western blot也证实了该蛋白具有与BIGH3抗体特异性的结合能力.MTT法和Boyden微孔膜双槽法分别证明所表达的BIGH3融合蛋白可促兔角膜细胞黏附和迁移.成功构建了人BIGH3重组融合蛋白表达质粒,纯化了该基因的原核表达产物,并通过重组融合蛋白BIGH3能促进兔角膜细胞与细胞外基质黏附及迁移,而验证了重组BIGH3蛋白的活性.
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| 关 键 词： | BIGH3基因 角膜细胞 黏附 迁移 组织构建 |
Effects of human BIGH3 cloning and expression on keratocytas adhesion and migration |
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| Ge Hong-yan,Shi Yan,Yang Fan,Zhang Yi,Liu Ping,Liu Han-ruo.Effects of human BIGH3 cloning and expression on keratocytas adhesion and migration[J].Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research,2010,14(50). |
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| Authors: | Ge Hong-yan Shi Yan Yang Fan Zhang Yi Liu Ping Liu Han-ruo |
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