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| TLR4干扰RNA腺病毒的构建及其对肺泡巨噬细胞内毒素反应的影响 | |
| 引用本文： | 吴飞翔,吕欣,俞卫锋,黄盛东,徐学武,孙玉明,袁扬,卞金俊.TLR4干扰RNA腺病毒的构建及其对肺泡巨噬细胞内毒素反应的影响[J].中国急救医学,2008,28(3):230-235. |
| 作者姓名： | 吴飞翔 吕欣 俞卫锋 黄盛东 徐学武 孙玉明 袁扬 卞金俊 |
| 作者单位： | 1. 解放军第二军医大学东方肝胆外科医院麻醉科,上海,200438 2. 解放军胸心外科研究所,上海,200433 3. 解放军第二军医大学长海医院麻醉科,上海,200433 |
| 摘 要： | 目的 构建表达大鼠TLR4 siRNA的腺病毒,并观察对内毒素诱导的大鼠肺泡巨噬细胞TLR4的抑制和TNF-α、IL-10释放的影响.方法合成双链寡核苷酸并克隆人pShuttleH1载体,pShutdeH1-TLR4线性化后电转化到含pAdEasy-l的BJ5183感受态细菌中获取重组质粒,重组质粒用脂质体转染293细胞获取重组腺病毒Ad-siTLR4;扩增、纯化腺病毒,TCID50法测定病毒滴度.原代培养大鼠肺泡巨噬细胞,腺病毒Ad-siTLR4感染后加入内毒素,采用RT-PCR和Westem blot观察TLR4蛋白及mRNA的表达,ELISA检测TNF-α、IL-10的释放情况.结果目的基因序列正确并成功克隆人腺病毒,腺病毒Ad-siTLR4滴度为5.72×109 pfu/mL.转染腺病毒后的内毒素诱导的肺泡巨噬细胞TLR4蛋白和mRNA水平下降,TNF-α、IL-10的表达均明显减弱.结论本研究成功构建了表达大鼠TLR4 siRNA的腺病毒,具有良好的抑制TLR4和TNF-α、IL-10的作用,为下一步动物体内实验基因治疗急性肺损伤奠定良好的基础. |
| 关 键 词： | Toll样受体4 RNA干扰 腺病毒 TNF-α IL-10 干扰 病毒 肺泡巨噬细胞 内毒素 反应 影响 reaction alveolar macrophage effect siRNA rats adenovirus 急性肺损伤 基因治疗 体内实验 动物 作用 研究 水平 蛋白 |
| 文章编号： | 1002-1949(2008)03-0230-05 |
| 修稿时间： | 2007年11月5日 |
Construction of the adenovirus expressing rats expressing TLR4 siRNA and its effect on alveolar macrophage reaction to LPS |
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