| 人胰岛新生相关蛋白基因的克隆及在毕赤酵母中的表达 |
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| 引用本文： | 沙建平,薛耀明,陈炫,曾展军,魏民,罗祥蓉,何飞英,王玲,卓凤婷. 人胰岛新生相关蛋白基因的克隆及在毕赤酵母中的表达[J]. 南方医科大学学报, 2008, 28(7): 1203-1206 |
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| 作者姓名： | 沙建平 薛耀明 陈炫 曾展军 魏民 罗祥蓉 何飞英 王玲 卓凤婷 |
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| 作者单位： | 南方医科大学南方医院内分泌科,广东,广州,510515;暨南大学第一附属医院临床实验中心,广东,广州,510630 |
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| 基金项目： | 863生物领域高技术首批重点课题 |
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| 摘 要： | 目的 在毕赤酵母中分泌表达具有生物学活性的重组人胰岛新生相关蛋白(rhINGAP),用于INGAP的生理功能研究和动物试验.方法 通过PCR扩增INGAP基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列的Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点处,再将融合基因αINGAP重组到表达质粒pPIC9K的BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ之间,Sal Ⅰ酶切线性化重组质粒INGAP/pPIC9K,电穿孔转化毕赤酵母,营养缺陷型培养基MD和G418筛选含高拷贝表达盒的酵母转化子,PCR鉴定是否含有目的 基因INGAP,甲醇诱导rhINGAP的表达,SDS-PAGE和Western blotting鉴定目的 蛋白,用ELISA定量测定生物学活性.结果 成功构建了重组表达质粒INGAP/pPIC9K,筛选得到3个阳性转化子,表达产物具有良好的抗原活性.结论 实现了rhINGAP在毕赤酵母中的高效分泌性表达.
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| 关 键 词： | 胰岛新生相关蛋白 毕赤酵母 分泌表达 |
Cloning and secretory expression of islet neogenesis-associated protein in Pichia pastoris |
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| SHA Jian-ping,XUE Yao-ming,CHEN Xuan,ZENG Zhan-jun,WEI Min,LUO Xiang-rong,HE Fei-ying,WANG Ling,ZHUO Feng-ting. Cloning and secretory expression of islet neogenesis-associated protein in Pichia pastoris[J]. Journal of Southern Medical University, 2008, 28(7): 1203-1206 |
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| Authors: | SHA Jian-ping XUE Yao-ming CHEN Xuan ZENG Zhan-jun WEI Min LUO Xiang-rong HE Fei-ying WANG Ling ZHUO Feng-ting |
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| Affiliation: | SHA Jian-ping1,XUE Yao-ming1,CHEN Xuan2,ZENG Zhan-jun1,WEI Min1,LUO Xiang-rong1,HE Fei-ying1,WANG Ling1,ZHUO Feng-ting1 1Department of Endocrinology,Nanfang Hospital,Southern Medical University,Guangzhou 510515,China,2Department of Clinical Experiment Center,First Affiliated Hospital of Jinan University,Guangzhou 510630 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | islet neogenesis-associated protein Pichia pastoris secretory expression |
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