| 正常大肠干细胞的条件永生化 |
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| 引用本文： | 朱永良,钟献,郑树.正常大肠干细胞的条件永生化[J].浙江大学学报(医学版),2004,33(5):379-384. |
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| 作者姓名： | 朱永良 钟献 郑树 |
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| 作者单位： | 浙江大学医学院,附属第二医院,浙江,杭州,310009 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划) |
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| 摘 要： | 目的:建立正常人大肠干细胞系.方法:用中性蛋白酶分级分离法从人胚肠中分离正常大肠干细胞,以含端粒酶逆转录酶和SV40大T抗原的重组逆转录病毒感染,对其进行永生化;然后,对建立的正常大肠干细胞系进行生物学特性鉴定.结果:用中性蛋白酶分级消化获得的AKP活性阴性的细胞群生长呈多角形.该细胞群转染含端粒酶逆转录酶和SV40大T抗原的重组逆转录病毒后8～12周出现上皮样细胞克隆,经细胞特性鉴定:PAS染色黏蛋白阳性,上皮细胞角蛋白pan、CK-8、CK-19均阳性;用ELISA-PCR法检测该细胞第12代和第43代端粒酶活性,分别为0.43、0.83;用Western blot法检测发现该细胞系表达端粒酶和SV40大T抗原;用RT-PCR检测示该细胞株表达Musashi-1 mRNA;以1×106细胞数接种裸鼠,观察4个月无肿瘤形成,软琼脂克隆试验培养无转化细胞克隆出现.结论:建立的正常的大肠干细胞系具有干细胞特征,可作为体外研究致癌剂/促癌剂作用机制的较理想实验靶点.
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| 关 键 词： | 大肠干细胞 端粒酶逆转录酶 SV40大T抗原 细胞 培养的 |
| 文章编号： | 1008-9292(2004)05-0379-06 |
| 修稿时间： | 2004年5月20日 |
Conditionally immortalized human colorectal crypt cell line |
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| ZHU Yong liang,ZHONG Xian,ZHENG Shu.Conditionally immortalized human colorectal crypt cell line[J].Journal of Zhejiang University(Medical Sciences),2004,33(5):379-384. |
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| Authors: | ZHU Yong liang ZHONG Xian ZHENG Shu |
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| Institution: | The Second Affiliated Hospital, College of Medicine, Zhejiang University, Hangzhou 310009, China. |
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