霍乱弧菌毒力基因LAMP方法快速检测

目的建立快速、特异检测霍乱弧菌的环介导等温扩增(LAMP)方法。方法针对霍乱弧菌毒素基因(ctxA)设计4条引物,建立环介导等温扩增检测方法,优化反应体系,测定方法的特异性和灵敏度,并进行鱼肉模拟样品和实际样品检测。结果 LAMP最佳反应条件为8.0 mmol/L Mg2+、0.6 mmol/L d NTPs、1.6μmol/L FIP和BIP(2条内引物)、0.2μmol/L F3和B3(2条外引物);对细菌纯培养物的检测灵敏度为10 cfu/m L,对鱼肉模拟样品检测灵敏度为102cfu/g;在16份实际样品中检测出4份ctxA基因阳性。结论建立的LAMP方法灵敏度高、特异性强,可快速地检测食品样品中霍乱弧菌。