| CLIP-PCR直接检测血液中疟原虫雌性配子体特异转录产物s25 mRNA |
| |
| 引用本文： | 杨珺源,骈红茹,杨明珠,郑直.CLIP-PCR直接检测血液中疟原虫雌性配子体特异转录产物s25 mRNA[J].基础医学与临床,2022,42(1):139-144. |
| |
| 作者姓名： | 杨珺源 骈红茹 杨明珠 郑直 |
| |
| 作者单位： | 中国医学科学院基础医学研究所 北京协和医学院基础学院 生物化学与分子生物学系,北京100005 |
| |
| 基金项目： | 国家科技重大专项(2018ZX10101001-001-005);中国医学科学院医学与健康科技创新(2018-I2M-1-001);国家自然科学基金(81902167)。 |
| |
| 摘 要： | 目的建立一种疟原虫雌性配子体的分子检测法。方法根据疟原虫雌性配子体特异性mRNA靶标(待测靶序列)即动合子表面蛋白(s25)的转录产物,设计特异性的捕获探针和连接探针。血液样品经裂解释放的mRNAs,无需核酸提取,通过"三明治"杂交被捕获到96孔板表面。洗去未结合探针后,将结合在mRNA靶标上的连接探针进行连接,得到两端为特殊设计序列的单链扩增模板。再用通用引物进行染料法qPCR扩增,或在端部设计TaqMan探针序列,用通用引物和通用TaqMan探针进行探针法qPCR扩增。评价这一基于捕获和连接扩增的方法(CLIP-PCR)的灵敏度、特异性和重复性并与普通的RT-qPCR方法进行比较,将其应用于临床样品的检测。结果该CLIP-PCR具有较高的灵敏度和特异性。与普通的RT-qPCR一样,均可检测低至11拷贝数的s25 mRNA靶标;而且该CLIP-PCR操作更简便。该CLIP-PCR可准确检测到疟疾患者血液中的雌性配子体。可将96个样品的检测时间缩短至3 h。结论建立了灵敏高效的染料法和通用TaqMan探针法CLIP-PCR检测疟原虫雌性配子体,为疟疾传播的控制、配子体大规模筛查奠定了基...
|
| 关 键 词： | 疟原虫 配子体 检测方法 捕获 连接 |
| 本文献已被 维普 万方数据 等数据库收录！ |
|
