| 直接测序与克隆测序检测不育男性H19基因甲基化印记的比较 |
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| 引用本文： | 丁婷,岳磊,余波澜,周华,袁静茹,刘敏,孙筱放.直接测序与克隆测序检测不育男性H19基因甲基化印记的比较[J].分子诊断与治疗杂志,2011,3(4). |
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| 作者姓名： | 丁婷 岳磊 余波澜 周华 袁静茹 刘敏 孙筱放 |
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| 作者单位： | 广州医学院第三附属医院妇产科研究所,广州市生殖与遗传重点实验室,广东,广州,510150 |
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| 摘 要： | 目的 建立亚硫酸氢盐修饰后测序技术,比较直接测序与克隆测序在不育男性精子印记基因DNA甲基化状态检测中的差别.方法 对样本进行精液分析和精子形态学分析,密度梯度离心法制备精液.提取精液基因组DNA并行亚硫酸氢盐处理,行半巢式PCR,将纯化后PCR产物与pCR 2.1-TOPO 载体连接及转化,分别对PCR产物及阳性克隆菌液进行测序.结果 PCR产物直接测序,前半部分序列丢失约40bp,1号CpG位点甲基化状态信息丢失.每例标本只有-个测序结果,会出现CpG位点的部分甲基化状态.挑取15个克隆进行测序,序列无丢失,18个CpG位点甲基化状态信息均完整.15个克隆CpG位点甲基化状态有所不同,显示出此样本的平均甲基化状态.结论 克隆测序不会造成序列丢失,CpG位点甲基化状态信息完整,克隆测序能较好地反应样本的平均甲基化状态.
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| 关 键 词： | 男性不育 H19基因 甲基化印记 亚硫酸氢盐修饰后测序法 直接测序 克隆测序 |
A Comparison between direct sequencing and clone sequencing in detection for methylation imprinting of H19 gene in infertile males |
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| DING Ting,YUE Lei,YU Bolan,ZHOU Hua,YUAN Jingru,LIU Min,SUN Xiaofang.A Comparison between direct sequencing and clone sequencing in detection for methylation imprinting of H19 gene in infertile males[J].Journal of Molecular Diagnosis and Therapy,2011,3(4). |
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| Authors: | DING Ting YUE Lei YU Bolan ZHOU Hua YUAN Jingru LIU Min SUN Xiaofang |
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