核转染对成体骨髓源性干细胞的影响

背景：成体骨髓源性干细胞是实施细胞治疗的重要细胞来源。对成体骨髓源性干细胞的示踪，是研究其移行、分化的规律与机制并进一步阐明再生潜能、疗效的关键。 目的：探讨经转染后的成体骨髓呈克隆样干细胞，在细胞表型、增殖能力、心肌分化潜能是否存在的影响。 方法：应用核转染技术利用U-23程序将编码maxGFP报告基因的载体对成体骨髓呈克隆样干细胞进行转染，应用MTT法对核转染前后的生长曲线进行测定，使用3 μmol/L 5-氮胞苷对核转染前后成体骨髓呈克隆样干细胞进行向心肌分化诱导，并利用RT-PCR对向心肌分化的特异性标记物GATA4与MLC-2v的表达进行测定。使用成年SD大鼠心肌梗死左前降支结扎模型，对使用经maxGFP转染的成体骨髓呈克隆样干细胞施心内注射并于注射后的第2天和第7天对经注射心脏行冰冻切片并观察maxGFP在体内的表达情况。 结果与结论：经核转染24 h后，第47代及第119代成体骨髓呈克隆样干细胞的转染率为49.4%和43.1%，转染后5 h，开始出现呈绿色荧光阳性的细胞，经核转染后仍能保持小圆球形、可贴壁、呈克隆样生长。MTT检测结果显示：核转染前后第47代及第119代均具有相似的生长曲线。核转染前第47代及119代细胞平均群体倍增时间分别为8.57，10.28 h；核转染后分别为9.42，10.42 h，各代前后比较差异无显著性意义(P=0.551，P=0.774)。RT-PCR检测结果显示：核转染前5-氮胞苷处理前后均表达GATA4，处理后MLC-2v条带更强；核转染后5-氮胞苷处理前后均表达GATA4，处理后MLC-2v条带更强，上述2个向心肌分化指标于转染前后变化并不明显。体内实验结果：心内注射经核转染后的成体骨髓呈克隆样干细胞，第2天及第7天可在经注射心肌中发现有少量绿色荧光阳性的细胞。提示，核转染可快速地将外源基因导入细胞，经核转染后的成体骨髓呈克隆样干细胞仍能保持其细胞形态、增殖能力及向心肌分化潜能，然而，经maxGFP基因核转染的成体骨髓呈克隆样干细胞，移植入心肌后只有少数细胞能表达经转染基因。

Nucleofection effects on adult bone marrow-derived stem cells