人重组钙依赖性磷脂结合蛋白V在大肠杆菌中的高效表达、纯化及细胞凋亡检测

目的：为细胞凋亡研究提供快速可靠的实验方法。方法：利用RT－PCR技术从人外周血单核细胞系U937 cDNA文库中扩增出编码钙依赖性磷脂结合蛋白V（Annexin V) cDNA，并克隆到大肠杆菌表达载体中，在大肠杆菌中表达含凝血酶识别序列的MS2 Annexin V融合蛋白。表达产物经凝血酶消化，可除去MS2细菌蛋白，再经离子交换层板纯化，可得成熟的Annexin V纯品，FITC标记后的Annexin V可用于细胞凋亡的检测。结果：在大肠杆菌表达的人重组Annexin V占菌体蛋白的56％，经纯化获得99％纯度的非融合型Annexin V，FITC标亡的Annexin V能有效地检测凋亡细胞。结论：成功地建立了批量获取Annexin V的技术路线，为推广高效检测凋亡技术提供了基础。