| 摘 要： | 目的分析甾醇类新药NSC67657诱导HL60细胞单核系分化中,β-catenin/ICAT蛋白的差异表达及相互作用,探讨NSC67657诱导细胞分化的作用机制。方法应用10μmol·L~(-1)NSC67657诱导HL60细胞分化,采用细胞化学染色和流式细胞技术评估细胞的分化方向和分化程度;通过RT-PCR和Western blot方法验证药物作用细胞前后β-catenin和ICAT基因和蛋白的表达差异;采用免疫共沉淀技术分析β-catenin与ICAT蛋白的相互作用情况;采用激光共聚焦技术协同分析目的蛋白的差异表达及细胞内定位。结果NSC67657可诱导HL60细胞向单核系分化。在10μmol·L~(-1)NSC67657作用5d后,CD14的表达可达到90%以上,细胞化学染色支持细胞单核系分化结论。分化后ICAT基因和蛋白表达明显升高(P<0.01),而β-catenin基因和蛋白表达明显下降(P<0.05)。免疫共沉淀结果显示,ICAT与β-catenin蛋白在细胞分化前后都存在相互作用,药物诱导细胞分化后两者蛋白相互作用条带吸光度明显增加。激光共聚焦结果显示,ICAT蛋白和β-catenin蛋白在胞质和胞核均有荧光,药物诱导HL60细胞分化后,ICAT蛋白胞质和胞核荧光均明显增加,β-catenin蛋白在核内荧光明显减弱,但胞质荧光强度增加,有蛋白胞质转位现象。结论 NSC67657能够诱导HL60细胞向单核系分化,且引起ICAT蛋白和β-catenin蛋白的表达差异;ICAT蛋白与β-catenin蛋白的相互作用增强及β-catenin蛋白从胞核向胞质的转位现象,提示NSC67657可能通过下调并阻止β-catenin蛋白入核,从而导致HL60细胞单核系分化。
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