子痫前期产妇胎盘组织中的氧化应激对Wiskott-Aldrich综合征关联蛋白2表达的影响

目的 探讨子痫前期产妇胎盘组织存在的氧化应激对胎盘滋养细胞Wiskott-Aldrich综合征关联蛋白2 (Wiskott-Aldrich syndrome related protein 2,WAVE 2)表达的影响. 方法 研究对象为2011年8月15日至2012年2月23日在重庆医科大学附属第一医院分娩的子痫前期产妇20例及正常足月产妇23例(对照组).剖宫产术后取胎盘组织,采用免疫组织化学法检测胎盘组织WAVE2的定位及分布.采用蛋白质印迹法检测胎盘组织WAVE2的表达,实时荧光定量聚合酶链反应法检测胎盘中WAVE2 mRNA的表达,采用组织匀浆法检测2组产妇胎盘组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,并对胎盘组织中ROS水平与WAVE2表达水平进行相关性分析.(2)通过构建体外滋养细胞缺氧复氧损伤模型,模拟缺血再灌注诱导的氧化应激损伤.人妊娠早期绒毛外滋养细胞株HTR 8/SVneo细胞贴壁完全后分别置于常氧(常氧组)和缺氧复氧条件(缺氧复氧组)下48 h,采用流式细胞仪分析细胞内ROS水平.采用Transwell实验观察细胞迁移侵袭状况.采用细胞免疫荧光法和蛋白质印迹法检测HTR-8/SVneo细胞内WAVE2的定位及表达水平的变化.采用独立样本t检验及Pearson相关检验对数据进行分析. 结果 (1)子痫前期组24 h尿蛋白、母体收缩压及舒张压均高于对照组,新生儿出生体重及胎盘重量均低于对照组24 h尿蛋白:(1.96±0.24)g与(0.08±0.05)g,t=19.436;母体收缩压:(154±13) mm Hg与(98±11) mm Hg,t=11.324;母体舒张压:(105±14)mm Hg与(69±8)mm Hg,t=9.612;新生儿出生体重:(2446±187)g与(3207±233)g,t=16.307;胎盘重量:(432±53)g与(536±67)g,t=14.562;均P＜0.05].子痫前期组WAVE2 mRNA表达低于对照组(0.28±0.07)与(1.01±0.02),t=12.747],WAVE2相对表达量低于对照组(0.63±0.08)与(1.34±0.19),t=11.648],ROS水平高于对照组(144.22±12.32) nmol/(mg·prot)与(75.17±8.71)nmol/(mg·prot),t=20.467],差异均有统计学意义(均P＜0.05).子痫前期组胎盘组织中ROS水平与WAVE2表达水平呈显著负相关(r=-0.726,P=0.000).(2)在常氧组中,HTR-8/SVneo细胞内的ROS水平为(82.9±5.8)％,而缺氧复氧组为(155.6±8.1)％,高于常氧组(t=12.747,P＜0.05).缺氧复氧48 h后的HTR-8/SVneo细胞与常氧组相比,迁移和侵袭力明显降低缺氧复氧组分别为(58.4±4.2)％和(51.9±3.3)％,常氧组为100％,t值分别为11.034和13.839,P均＜0.05].细胞免疫荧光检测结果显示,WAVE2定位于滋养细胞的细胞质中.缺氧复氧48 h后,HTR-8/SVneo细胞中WAVE2的表达强度明显弱于常氧组(0.37±0.05与0.76±0.06,t=8.631,P＜0.05). 结论 子痫前期胎盘组织中存在过度氧化应激,与胎盘组织中WAVE2表达下调密切相关.缺氧复氧致氧化应激损伤可下调滋养细胞WAVE2的表达；WAVE2表达下调可能损伤滋养细胞迁移侵袭能力,从而参与子痫前期的发生发展.

Effect of oxidative stress on human Wiskott-Aldrich syndrome related protein 2 expression in placental trophoblasts in preeclampsia