| Nesprin蛋白对骨髓间充质干细胞的影响 |
| |
| 引用本文： | 杨文钢,薛松,连锋,汪永义,胡振雷,朱洪生.Nesprin蛋白对骨髓间充质干细胞的影响[J].中国胸心血管外科临床杂志,2012,19(4):408-413. |
| |
| 作者姓名： | 杨文钢 薛松 连锋 汪永义 胡振雷 朱洪生 |
| |
| 作者单位： | 上海交通大学医学院附属仁济医院心血管外科,上海,200127 |
| |
| 基金项目： | 上海市科委基金资助项目(064119636)~~ |
| |
| 摘 要： | 目的构建nesprin蛋白siRNA慢病毒载体(LV-siNesprin),感染骨髓间充质干细胞(MSCs),观察nesprin蛋白对MSCs的影响。方法针对nesprin靶基因序列设计并合成4对miRNA oligo,并将4对oligo退火成双链DNA,测序鉴定。将4种miRNA干扰质粒(SR-1、SR-2、SR-3、SR-4)转入大鼠血管平滑肌细胞,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白印迹法(Western blotting)检测干扰效应,筛选最佳干扰序列;将最佳干扰序列和pDONR221载体进行重组反应,获得含干扰序列的入门载体,再将入门载体和慢病毒表达的目的载体pLenti6/V5-DEST进行重组反应获得含干扰序列的LV-siNesprin+绿色荧光蛋白(GFP),包装慢病毒,测定病毒滴度。LV-siNesprin+GFP转染MSCs,Western blotting鉴定比较nesprin蛋白表达情况(分为LV-siNesprin+GFP组、GFP对照组和正常细胞组),用4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察细胞核形态改变和四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测MSCs感染LV-siNesprin后24 h、48 h、72 h和96 h的增殖情况(分为LV-siNesprin+GFP组、GFP对照组和正常细胞组)。结果测序证实合成的4对miRNA oligo正确,RT-PCR和Western blotting筛选出最佳干扰miRNA质粒SR-3,成功构建LV-siNesprin,包装慢病毒,病毒悬液的活性滴度为1×106ifu/ml。LV-siNesprin转染MSCs后,nesprin蛋白表达明显下降,出现细胞核融合、核碎裂等形态学改变;MTT法检测显示,LV-siNesprin+GFP组MSCs增殖速度较GFP对照组和正常细胞组减慢。结论 Nesprin蛋白对MSCs核膜稳定维持核膜空间结构起作用,并利于细胞增殖更新。
|
| 关 键 词： | Nesprin蛋白 骨髓间充质干细胞 细胞增殖 慢病毒载体 |
Experiment of Nesprin Protein Influence on Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells |
| |
| YANG Wen-gang
,
XUE Song
,
LIAN Feng
,
WANG Yong-yi
,
HU Zhen-lei
,
ZHU Hong-sheng.Experiment of Nesprin Protein Influence on Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells[J].Chinese Journal of Clinical Thoracic and Cardiovascular Surgery,2012,19(4):408-413. |
| |
| Authors: | YANG Wen-gang XUE Song LIAN Feng WANG Yong-yi HU Zhen-lei ZHU Hong-sheng |
| |
| Institution: | .(Department of Cardiovascular Surgery,Renji Hospital Affiliated to Medical College of Shanghai Jiaotong University,Shanghai 200127,P.R.China) |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Nesprin protein Bone marrow mesenchymal stem cells Cell proliferation Lentivirus vector |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
