| 摘 要： | 目的 探讨miR-365对大肠癌细胞组蛋白修饰和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响及其机制。方法 采用反转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)检测大肠癌细胞株(高转移细胞系HCT-116、LoVo和中低转移细胞系SW480)中miR-365 mRNA表达量。通过转染miRNA模拟物、抑制物构建miR-365过表达和敲低模型,SW480细胞分为miR-365模拟物组、miR-365抑制物组和NC组;采用RT-PCR检测miR-365和特异性泛素肽酶22(ubiquitin-specific peptidase 22,USP22)mRNA表达水平;采用双荧光素酶报告基因检测miR-365与USP22的相互作用;Western blot法检测Vimentin、N-cadherin、E-cadherin蛋白表达水平;采用斑点杂交法检测H2A和H2B蛋白泛素化修饰;采用Transwell法检测各组细胞迁移情况,细胞划痕实验检测细胞转移能力。...
|
