Hh信号通路抑制剂Cyclopamine对Hela细胞增殖、侵袭迁移的影响

目的:研究Hh信号通路抑制剂Cyclopamine作用Hela细胞后Gli1、FoxM1、上皮间质转化(EMT)过程相关标记物表达的改变及对其增殖、侵袭迁移能力的影响,探究Gli1、FoxM1、EMT过程的可能作用关系,以期为宫颈癌的分子靶向治疗提供多个靶点。方法:采用实时定量RT-PCR、Western Blot技术检测Hela、Siha细胞系Hh信号通路中Shh、Ptch1、Smo的表达情况,选择Hh信号通路表达较高的Hela细胞系作为后续实验细胞,利用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测不同浓度Cyclopamine作用Hela细胞后其增殖能力的改变;采用Transwell小室试验检测Hela细胞侵袭、迁移能力的改变,并采用实时定量RT-PCR、Western Blot技术检测Gli1、FoxM1、EMT过程标记物的表达情况。结果:(1)Hela细胞中Hh信号通路成分(Shh、Ptch1、Smo)在mRNA水平显著高于Siha细胞(P<0.01),且相应蛋白的表达强度也高于Siha细胞;(2)Cyclopamine对Hela细胞增殖的抑制作用具有时间、剂量依赖性;(3)Cyclopamine作用Hela细胞48h后,细胞侵袭试验显示,实验组侵袭细胞数较对照组明显降低(P<0.01)。细胞迁移试验显示,实验组细胞迁移细胞数较对照组明显降低(P<0.01);(4)Cyclopamine作用Hela细胞48h后,实验组Gli1、FoxM1、Vimentin在mRNA水平的表达显著低于对照组(P<0.05),且相应蛋白的表达强度也低于对照组;E-cadherin在实验组中mRNA层面的表达显著高于对照组(P<0.05),且相应蛋白的表达强度也高于对照组。结论:抑制Hh信号通路可显著降低Hela细胞系增殖、侵袭迁移能力,FoxM1很可能是Hh信号通路末端转录因子Gli1的下游靶基因,且其对宫颈癌细胞系增殖、侵袭迁移的作用很可能是通过EMT实现的。

Effect of Cyclopamine,an Hh Signal Pathway Inhibitor,on the Proliferation,Invasion and Metastasis of Hela Cells