RNF8促进表皮生长因子受体野生型非小细胞肺癌吉非替尼耐药的机制分析

摘 要：［目的］ 探讨RNF8在携带野生型表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）非小细胞肺癌吉非替尼（Gefitinib）耐药中的作用及机制。［方法］ 通过RNAi法敲低RNF8,通过CRISPR/Cas9方法敲除RNF8,采用细胞敏感性实验和细胞克隆形成实验法评估敲低或敲除RNF8的A549细胞对Gefitinib的敏感性变化;采用Western blot法检测细胞中p-EGFR、EGFR、p-Akt、Akt和RNF8的表达水平;以裸鼠异体成瘤模型评估在体内敲除RNF8对Gefitinib敏感性的影响;以药物浓度逐步递增法构建对Gefitinib耐药的A549稳定细胞系,通过药物敏感性实验检测敲低RNF8的耐药细胞系对Gefitinib敏感性变化。［结果］ 在A549细胞中敲低RNF8,与对照组相比,不同浓度（2、5、10 μmol/L）的Gefitinib对细胞的抑制率均显著增强（12.21%±1.68% vs 45.48%±1.35%;25.13%±1.57% vs 60.93%±1.40%;36.67%±5.89% vs 78.92%±2.36%）（P均<0.001）。在不同浓度（5、10 μmol/L）Gefitinib处理下,与对照组相比,RNF8敲除的A549细胞克隆形成数量显著减少（45.00±16.05 vs 26.00±4.18;34.33±9.82 vs 11.67±1.21）（P均<0.001）。机制上,在A549细胞中敲低或敲除RNF8,Gefitinib对细胞中Akt磷酸化水平的抑制作用增强;过表达RNF8,Gefitinib对细胞中Akt磷酸化水平的抑制作用减弱。在裸鼠异体移植模型中,Gefitinib处理后,与对照组相比,RNF8敲除组小鼠肿瘤体积显著缩小［(450.98±98.54) mm3 vs (163.48±37.72) mm3,P<0.001］。在Gefitinib抵抗的A549细胞中用不同的siRNA敲低RNF8,Gefitinib对细胞的增殖抑制率均显著增强（P均<0.001）,且敲低RNF8重新诱导Gefitinib对细胞中Akt磷酸化的抑制。［结论］ RNF8通过调节Akt的磷酸化激活促进野生型EGFR非小细胞肺癌细胞Gefitinib耐药。

Mechanism of RNF8 Facilitating Gefitinib Resistance in Non-Small Cell Lung Cancer with Wild-Type EGFR